猪精子冷冻损伤分子机理的研究

来自猪精子冷冻保存和冷冻损伤机理两方面的研究表明，只有阐明精子冷冻损伤的分子机制，才能使猪精子冷冻保存技术取得突破性进展，鉴于损伤机理研究需要和蛋白质组学的先进性，本项目运用比较蛋白组学的理论与技术，以猪新鲜精子和冻融精子为试验材料，采用适合于猪精子特点的方法分别制备猪新鲜精子和冷冻精子全蛋白，通过二维电泳检测分析新鲜精子和冻融精子在质和量上存在差异的蛋白质，酶解消化后，借助于质谱及生物信息学方法系统地鉴定冷冻过程中发生变化的蛋白质，采用WESTERN杂交验证差异表达蛋白，对经过验证证明了的差异表达蛋白质，根据其序列信息构建真核表达载体，并将其转染到原代培养的精原细胞中，通过对转基因细胞进行培养，观察分析细胞在目标基因超表达和敲除表达时的生长发育及相关基因的表达，初步解析猪精子冷冻损伤的分子机理，为实现猪精子冷冻保存技术突破提供理论依据，同时，本研究对其它畜种的同类研究具有一定的指导意义。