移植慢病毒介导hVEGF165-EGFP双表达基因转染的内皮祖细胞防治多器官功能障碍研究

微血管内皮损伤和微循环障碍是造成创伤后多器官功能障碍（MODS）的重要环节，内皮祖细胞（EPC）在创伤环境下，可分化为血管内皮细胞以促进心、肝、肾等重要器官官功能障碍的修复，但EPC在体内受到很多因素的调控。因此，如何在创伤状态下最大限度的促进EPC增殖、动员成为创伤后MODS治疗的关键。本项目首先通过失血性休克和内毒素血症的“二次打击”方法复制出双相迟发兔多器官功能障碍综合征模型，发现创伤后体内的EPC和VEGF水平呈现迅速上升，但随着病程的进展，两者均出现明显的下降，并与创伤后MODS的发生和发展密切相关。在体外利用密度梯度离心法获得单个核细胞，经体外诱导分化为EPCs，制备携带VEGF-EGFP融合基因的慢病毒载体，并体外转染EPC后发现，EPCs的增殖，迁移，分化，成血管及抗炎性杀伤能力均得到明显的增强，为在体外短时间能获得具有较强的抗炎性因子杀伤作用及较高靶向迁移能力的EPCs奠定基础。EPCs的分化能力的提高也使得EPCs在体外向成熟内皮细胞转化的速度加快，降低了EPCs自我更新及体外传代的能力。对MODS动物模型进行自体慢病毒/VEGF-EGFP-EPC移植治疗效果显示，移植经慢病毒介导的hVEGF165-GFP双表达基因转染的内皮祖细胞可以有效的抵抗严重创伤后机体内环境炎性因子对EPCs的杀伤作用。同时各重要器官的免疫组化检测也显示微血管密度明显高于单纯移植EPC和对照组动物，提示EP并可以在机体发生MODS后向不同组织迁徙或归巢，通过对微循环具有重要的修复及促进血管新生，明显改善创伤后缺血缺氧引起的脏器功能障碍，防止MODS的发生和发展，同时可改善创伤后MODS动物的预后以及延长生存时间。