CRF相关肽1型受体对结肠炎相关癌的作用机制研究

本项目执行顺利，达到预期目标。发现了：1）.CRHR1敲除鼠结肠癌病程发展明显慢于野生型小鼠。AOM+DSS造模后，CRHR1敲除小鼠（CRHR1-/-）同野生型小鼠（WT）相比，肿瘤数目及大小明显减小,且炎症、溃疡、增生等组织学评分明显低于WT，异型增生分级也多处于低度和中度异型增生，而WT较多处于中度和和重度异型增生。此外，CRHR1-/-结肠分泌的抗炎因子IL-4和IL-10明显高于WT，而促炎因子如IL-1β，IL-6，TNF- α及COX-2明显少于WT，此外趋附因子IFN-γ分泌量也小于WT。2）.CRHR1对结肠癌进展的影响发生在结肠癌早期。在给予AOM后的第10天，15天，20天和25天，通过分别对比CRHR1-/-和WT的组织学变化，发现早在结肠癌发生早期（10天-25天），CRHR1敲除鼠的癌症进程明显慢于野生型小鼠，从炎症浸润，溃疡，增生等方面进行组织学评分鉴定。此外促炎和抗炎因子的表达量也在早期开始发生差异；3）.CRHR1通过促进炎症细胞数目的增加及炎症因子的分泌能力，从而促进CAC的发生和发展。我们提取了小鼠的外周血单核细胞，对比野生型和CRHR1敲除鼠外周血内炎症细胞数目的差异，发现敲除鼠体内淋巴T细胞、B细胞和巨噬细胞数目明显小于野生型小鼠且CRHR1主要分布在巨噬细胞。于是我们提取了小鼠血液中的单个核细胞，对比野生型和CRHR1敲除鼠单核细胞的分泌炎症因子（IL-1β，IL-6，TNF-α和IL-10）能力,发现敲除鼠单核细胞分泌促炎因子的能力小于野生型小鼠；4）.CRHR1通过上调NF-κB入核及STAT3磷酸化两条信号通路，促进结肠上皮细胞的增殖并抑制其凋亡。Brdu结果显示，敲除鼠结肠部位增殖的细胞明显少于野生型小鼠，而Turnel的结果显示，敲除鼠结肠部位凋亡的细胞明显多于野生型小鼠。通过分析NF-κB的入核情况，发现CRHR1-/-小鼠体内NF-κB的入核减少，且STAT3的磷酸化水平也明显低于野生型小鼠。这些结果为了解CRFR1在肠炎向肠癌转化方面的作用提供了重要的实验依据。