重要研究进展.本课题已完成申请书预定的研究内容，成功构建了survivin 启动子调控的shRNA真核表达载体pEntry-SUR-GFP-shRNA。经脂质体转染HeLa细胞 293T细胞，HepG-2细胞后，证明survivin具有肿瘤特异性,并且在HepG-2细胞的表达程度高于HeLa细胞，RT-PCR检测HepG-2细胞中GFP基因的mRNA表达间接证明该表达是由于Survivin基因启动。（2）RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭CD133基因表达；(3)RT—PCR和westemblot检别显示转染pAd-SUR-GFP—shRNA(972).pAd-SUR-GFP—shRNA2377.pAd-SUR-GFP—shRNA482后CDl33 mRNA和蛋白表达均受到显著抑制，与未转染组和pAd-SUR-GFP-shRNA NC组相比，pAd-SUR-GFP—shRNA(972）组细胞凋亡比例明显增加(P<O．05)；pAd-SUR-GFP—shRNA (972）组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制(P<O．05)。.深入和扩展了以下研究成果：1.用茶多酚（EGCG，0-50 μM)呈剂量依赖性抑制鼻咽癌干细胞的细胞活性、克隆形成、迁移力、并逆转EMT特性（P < 0.05或P < 0.01）；EGCG联合顺铂能抑制鼻咽癌干细胞的裸鼠成瘤能力(n = 4; P<0.01)，且能有效地抑制成瘤组织中干性基因及EMT标志物的表达；EGCG抑制NF-κB p65核内转位及serine536 位点的P65磷酸化而抑制P65活性（P < 0.05或P < 0.01）；构建慢病毒载体沉默P65能有效抑制鼻咽癌干细胞的迁移、自我更新能力，并抑制干性基因bmi-1、Twist1的表达及逆转EMT（P < 0.05或P < 0.01）；EGCG或shp65均能有效抑制Twist1启动子活性，两者联合干预对Twist1启动子活性有显著抑制效应（P < 0.05或P <0.01），揭示了EGCG能抑制NF-κB p65对Twist1的转录调控，呈剂量依赖性抑制鼻咽癌干细胞的细胞活性、克隆形成、迁移力。