RANTES参与附睾管腔酸性微环境调控的作用和机制

附睾上皮细胞之间存在复杂的网络关系，共同维持管腔液的酸性环境，保持精子处于静息状态。其中基细胞可以感受附睾管腔内ANGII的浓度变化，并通过NO调节邻近亮细胞v-ATPase泵运H+，以达到维持附睾管腔液酸性微环境的目的。我们的前期研究表明，受激活调节正常T细胞表达和分泌因子RANTES主要表达于人附睾上皮的巨噬细胞, 且在附睾尾部表达较多。本研究首先用免疫组化及荧光双标技术观察RANTES及其受体在人和大鼠附睾的共定位；然后建立大鼠附睾微灌注模型，在附睾尾部给予1 μΜ RANTES刺激，对照组以pH 6.8的PBS代替，作用30分钟后取材，利用Real time-PCR、Weternblot、免疫荧光共聚焦技术检测V-ATPase以及iNOS在附睾上皮的表达变化；最后建立SD大鼠输精管切除模型以破坏附睾管腔酸性微环境，进一步利用Real time-PCR、Western-blot、免疫荧光检测V-ATPase的表达变化、放免法检测附睾组织匀浆液上清内ANGII浓度的变化，Real time-PCR、Western-blot检测ANGII受体AGTR2、RANTES、CCR1、CCR5以及iNOS表达的变化。结果：免疫组化结果显示RANTES、CCR1、CCR5在人和大鼠附睾头、体、尾均有表达，且在尾部表达较强，免疫荧光双标显示RANTES表达于人和大鼠附睾上皮的巨噬细胞，CCR1、CCR5和RANTES在人和大鼠附睾头、体、尾均有共定位信号。附睾尾部微灌注RANTES刺激后，与对照组相比，大鼠附睾组织iNOS、V-ATPase表达明显增高，免疫共聚焦结果进一步证实附睾巨噬iNOS表达增强，亮细胞顶膜V-ATPase聚集明显增多。输精管切除术后8周，手术组附睾管壁变薄，管腔增大、不规则，附睾液pH值升高；附睾尾部V-ATPase表达明显降低，附睾亮细胞顶膜V-ATPase聚集减少；附睾组织内ANGⅡ浓度显著下调，AGTR2、RANTES、CCR1、CCR5及iNOs的表达均降低。结论：RANTES与受体CCR1、CCR5在人和大鼠共表达于附睾上皮巨噬细胞，RANTES可能在ANGII的刺激下，通过与受体结合促进巨噬细胞释放NO，参与基细胞与亮细胞的串话机制，从而协助维持附睾管腔酸性环境的平衡。