基于多价免疫生物传感器的原料乳中多种蛋白高通量检测新方法研究

合成了纳米金粒子（AuNPs）和纳米磁珠（IMBs）探针，建立了系列检测牛乳中主要蛋白的分析平台。.1. 制备了抗β-酪蛋白的McAb和PcAb，并分别修饰AuNPs，建立了β-酪蛋白的双抗夹心ELISA和AuNPs聚集比色法。线性动态范围和最低检测限分别为0.08-250 μg/mL和0.03 μg/mL。该方法的优点是灵敏性高、特异性强、不需要复杂样品处理 [Food Chemistry, 2013, 141 (1): 167-173. (IF = 3.259); Food Chemistry, 162 (2014) 22–26. (IF = 3.259)]。.2. 以免疫磁珠(IMBs)为固相载体，以包被在磁珠上的抗β-酪蛋白McAb（IMBs-McAb）为捕获探针，以标记HRP的抗β-酪蛋白PcAb （HRP-PcAb）为检测探针，建立了β-酪蛋白的IMBs-ELISA 。检测限为0.4 μg/mL, 检测前只需要将样品稀释100倍，30分钟即可完成整个检测过程 [Food Chemistry, 158 (2014) 445–448. (IF = 3.259)]。.3. 建立了以PcAb包被MBs （PcAb-MBs）为捕获探针，以McAb包被 AuNPs和HRP （McAb-AuNPs-HRP）为信号放大探针，与β-酪蛋白形成三明治结构（MBs-PcAb–β-酪蛋白-McAb–AuNPs）的双纳米粒子检测体系。HRP作为酶促反应驱动剂，催化底物产生的光信号与β-酪蛋白的量成正向相关，敏感性是传统ELISA的6～7倍[Biosensors and Bioelectronics, 66 (2015) 559-564. [IF = 6.451]]。.4. 用HRP和抗κ-酪蛋白的McAb双标记AuNPs，其中McAb和HRP分别作为探测器和信号放大催化底物，合成了κ-酪蛋白特异性探针。线性反应范围为4.2 ng/mL～560 ng/mL，敏感性比传统HRP-IgG高10倍[Biosensors and Bioelectronics, 61(2014) 241–244.[IF = 6.451]]。