以广谱单链抗体(ScFv)为探针筛检水环境及水产品中中毒性藻毒素

中毒性藻毒素广泛存在于水环境及水产品中，对渔业及人类的健康危害较大。目前，国内外还没有对藻毒素的广谱快速筛检方法。本课题拟以微囊藻毒素、西加毒素和短裸甲藻毒素为实验材料，制备三种藻毒素的完全抗原。分别免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术，建立分泌抗各自毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用RT-PCR技术从杂交瘤细胞株中提取单克隆抗体的可变区重链（VH）和轻链（VL）基因，通过人工设计的柔性连接肽Linker(Gly4Ser)3将其组装成各自的单链抗体(ScFv)基因，再将各ScFv基因串联，组成广谱ScFv基因，构建广谱ScFv的表达载体，获得抗三种藻毒素的广谱ScFv。提纯表达产物，免疫动物，获得多克隆抗体。采用竞争ELISA确定广谱ScFv与三种毒素的免疫原性，最后以广谱ScFv为探针，建立三种藻毒素的简便、快捷、灵敏、高效的免疫学筛检方法，即ELISA方法和胶体金试纸条层析法。