小剂量TPC对脑出血SVZ细胞迁移、增生、分化的影响
批准号:
81301010
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
关景霞
依托单位:
学科分类:
H0906.脑血管结构、功能异常及相关疾病
结题年份:
2016
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
周琴、解燕春、曾艳平、王家华、王利、陈煦明
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中文摘要
侧脑室外侧壁的脑室下带(SVZ )是脑内具有再生能力的区域之一,我们的前期研究表明脑出血可激活SVZ细胞再生,再生的SVZ细胞可向损伤区域迁移。然而脑组织通过这种内源性神经细胞再生而获得的自我修复能力是非常有限的,不足以改善缺失的神经功能。我们试图寻找影响脑出血后内源性神经细胞再生的因素,来增强内源性神经细胞的再生能力。凝血酶在脑出血后内源性神经细胞再生中发挥重要作用,我们的前期研究表明小剂量凝血酶预处理(TPC)可减轻随后脑内注射大剂量凝血酶或脑出血引起的脑损伤,但小剂量TPC对内源性神经细胞再生产生何种影响目前尚不明确。因此本研究拟采用时间间隔成像系统在活体脑片上动态追踪SVZ细胞,以及应用免疫荧光双标技术、荧光金逆行标记技术结合细胞内微电极记录技术,探讨TPC对脑出血后SVZ细胞再生、迁移、分化及整合至神经环路的影响,为脑出血后激发内源性神经细胞再生能力的研究提供新思路。
英文摘要
The subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle is one of regions possessing regeneration potentiality in the brain. Our studies have indicated intracerebral hemorrhage can induce SVZ regeneration and regenerated SVZ can migrate to the injured area. However, self-repair capacity acquired by brain tissues by endogenous neurogenesis is very limited and not enough to ameliorate neurological deficit. We attempt to enhance endogenous neurogenesis by exploring factors that affect endogenous neurogenesis. Recent studies have showed thrombin plays an important role in the endogenous neurogenesis after intracerebral hemorrhage. Our studies have showed thrombin preconditioning at a small dose can attenuate injury induced by thrombin at a large dose or intracerebral hemorrhage. However, the effect of thrombin preconditioning at a small dose on endogenous neurogenesis is uncertain. Therefore, this study plans to dynamically trace SVZ cells in living brain slices by time-lapse microscopy and to explore the influence of TPC at a small dose on SVZ cells regeneration, migration, differentiation and integration into the existing brain circuitry after cerebral hemorrhage by immunofluorescent double labeling, confocal microscopy, retrograde labeling of fluorogold and intracellular microelectrode recording methods, aiming to provide novel ideas for activation of endogenous neurogenesis after intracerebral hemorrhage.
脑出血后的神经功能缺失目前仍然缺乏有效的治疗手段。侧脑室外侧壁的脑室下带(SVZ )是脑内具有再生能力的区域之一。近期研究表明脑出血可激活SVZ细胞再生,小剂量凝血酶预处理(TPC)可减轻脑出血引起的脑损伤,但其对内源性神经细胞再生的影响目前尚不明确。本研究采用胶原酶脑内立体定向注射技术制作大鼠脑出血模型。Brdu在体标记SVZ细胞后,应用酶联免疫双标方法分别检测Brdu和Neu、Brdu和Hu、Brdu和Tuj-1共表达。荧光染料Dil在体标记SVZ细胞后,在活体脑片上动态追踪SVZ细胞迁移的速度。通过检测Brdu和突触蛋白-Ⅰ共表达,来明确小剂量TPC对迁移至纹状体区SVZ细胞突触形成能力的影响。本研究发现TPC组同侧SVZ和基底节区Brdu和Neu、Brdu和Hu、Brdu和Tuj-1双标阳性细胞在3天时开始增加,与对照组和脑出血组比较均有明显的统计学差异(P<0.01),阳性细胞数目在14天时达高峰,一直持续至21天,然后开始下降,但直至28天仍有明显表达,此时与对照组和脑出血组比较仍有明显统计学差异(P<0.01),说明小剂量TPC能够促进脑出血后SVZ细胞再生和分化能力。活体脑片上观察到脑出血后3天时SVZ迁移速度相对较慢(2.11±0.17µm/h),14天时的迁移速度最快(6.32±0.38µm/h),然后逐渐减慢。TPC组3天时的迁移速度明显快于脑出血组(4.23±0.25µm/h),7天时逐渐增快(6.53±0.37µm/h),14天时达高峰(8.23±0.47µm/h),21天时开始逐渐减慢,在各个时间点TPC组的迁移速度明显快于脑出血组,有明显的统计学差异(P<0.01),提示小剂量TPC能够促进SVZ细胞向损伤区域迁移。脑出血后3天,纹状体区没有明显的Brdu和突触蛋白Ⅰ双标阳性细胞,7天时可见少数阳性细胞,14天时阳性细胞达高峰,21天时开始下降。TPC组3天时可见明显的Brdu和突触蛋白Ⅰ双标阳性细胞,7天时阳性细胞数目进一步增加,14天时达高峰,持续至21天,28天时开始下降。在各个时间点TPC组阳性细胞较脑出血组明显增加,差异具有显著性(P<0.01)。本研究表明小剂量TPC能够增强脑出血后SVZ细胞再生、分化、迁移以及突触形成能力,为脑出血后激发内源性神经细胞再生能力的研究提供新思路。
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Effect of thrombin preconditioning on migration of subventricular zone-derived cells after intracerebral hemorrhage in rats
凝血酶预处理对大鼠脑出血后室下区来源细胞迁移的影响
DOI:10.1080/01616412.2016.1210356
发表时间:2016-07
期刊:Neurological Research
影响因子:1.9
作者:Shaofeng Zhang;Qin ZHou;Zhenhua Yuan;Zunenng Lu
通讯作者:Zunenng Lu
DOI:--
发表时间:2016
期刊:卒中与神经疾病
影响因子:--
作者:张少锋;袁振华;黄婷婷;卢祖能
通讯作者:卢祖能
DOI:--
发表时间:2015
期刊:卒中与神经疾病
影响因子:--
作者:张少锋;袁振华;黄婷婷;卢祖能
通讯作者:卢祖能
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