痛泻要方干预microRNA214诱导的结肠炎癌演进过程关键分子事件研究

The evolution process of the transformation from colitis-associated cancer to “inflammatory-atypical hyperplasia-cancer” corresponds to TCM Pathogenesis of “deficient spleen- liver sthenia- phlegm-stasis-poisons stagnant”. Former study also proved that it is effective to induce transformation of colitis-associated cancer by Tongxieyaofang. The key molecular event of NF-κB/STAT3/Wnt is closely related to the malignant change of colitis-associated cancer. And a new research shows that this upstream of cascade reaction-sustained over-expression of microRNA214 induces above-mentioned molecular event. Based on this, a hypothesis is proposed: Tongxieyaofang regulates the occurrence and development of downstream key molecular event and intervenes the evolution process of transformation of colitis-associated cancer by inhibiting sustained over-expression of microRNA214. This project will establish an AOM/DSS colitis-associated cancer animal model by immunochemistry staining、ELISA、Western Blot，reveal biological effect、regulation pathway and mechanism of action in the evolution process of inducing transformation of colitis-associated cancer by Tongxieyaofang, illustrate the diagnosis and treatment regularity of the transformation of colitis-associated cancer，enrich the connotation of the hepatosplenic disorder pathogenesis theory .

结肠炎癌转化“炎－不典型增生－癌”演进过程与“土虚-木乘-痰瘀毒结”的中医病机相契合，前期研究亦证实痛泻要方干预结肠炎癌转化有效。NF-κB/STAT3/ Wnt关键分子事件与结肠炎的恶变关系密切，而最新研究发现这一级联反应的上游，microRNA214持续过表达诱导了上述分子事件。据此提出假说：痛泻要方可能通过抑制microRNA214的持续过表达从而调控下游关键分子事件的发生发展，干预结肠炎癌转化的演进过程。本项目拟建立AOM/DSS结肠炎癌经典动物模型，采用免疫组织化学染色法、ELISA、Western Blot等检测技术，揭示痛泻要方干预结肠炎癌演进过程的生物学效应、调控途径和作用机制，阐明结肠炎癌转化的证治规律，丰富肝脾不和病机理论的内涵。

炎症相关性结肠癌由肠道慢性炎症持续，经历“炎-不典型增生期-癌”演进过程发展而来，在亚临床病变前进行风险控制是研究热点与难点。课题组基于痛泻要方干预结肠炎癌转化疗效确切，和“炎-不典型增生-癌”演进过程与“土虚-木乘-痰瘀毒结”中医病机的契合性，提出“痛泻要方在影响肠上皮细胞关键分子事件的基础作用之上，更能有效抑制上游 microRNA214 的持续过表达状态，从而干预右端为主要效应部位的结肠炎癌转化演进过程”的科学假说。. 本研究建立AOM/DSS 诱导的结肠炎癌小鼠模型，在炎症起始环节给予痛泻要方干预，观察该方对结肠炎癌转化的阻延作用，明确其在“炎-不典型增生-癌”演进过程中优势效应环节及部位，并进行临床验证，明析结肠炎癌转化证治规律。结合体外实验，观察该方及其各药物组分对结直肠癌模型相关细胞、细胞因子的影响，重点围绕炎-癌转化调控网络对痛泻要方的调控途径、作用机制进行了探讨。. 动物实验结果显示：痛泻要方可改善肠道炎症反应、修复肠黏膜屏障损伤、减少ACF形成，且其效应发挥与降低疾病早期炎症相关因子及致癌核转录因子，抑制细胞增殖、促进细胞凋亡，调控Wnt/β-catenin信号通路、TGF-β1/SMAD4信号通路有关。但痛泻要方对 microRNA214 表达不具有调控作用，课题组将进一步通过转录组测序等手段检测痛泻要方发挥作用的潜在靶点并验证。. 细胞实验结果显示：痛泻要方含药血清可抑制结肠癌细胞HCT-116 细胞活性和其迁移能力，其主要单体羽扇豆醇、橙皮油素、紫花前胡素、白藜芦醇等可明显抑制结肠癌细胞活力。. 临床研究结果显示：右半结肠癌病位多在脾、肝，常见病理因素为血虚、气滞，抑木扶土之痛泻要方干预结肠炎癌的优势部位或是在右半结肠。. 本研究基本明确痛泻要方干预结肠炎癌转化优势效应阶段及生物机制、阐明结肠炎癌转化的证治规律，在肿瘤病症防治中实践肝脾不和病机理论提供科学依据。

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