基于MLCK小鼠模型探讨肠上皮屏障和炎症在IBD发病中的作用

炎症性肠疾病（IBD）是一种胃肠道的慢性非特异性炎症性疾病，目前对于肠上皮通透性升高及炎症在IBD发生发展中的作用机制尚未完全阐明。为进一步阐明肠上皮通透性及炎症和IBD之间的关系，我们通过长MLCK基因敲除小鼠研究了肠上皮屏障在IBD发生中的作用。我们首先建立了CD4+CD45Rbhi T细胞诱导的IBD小鼠模型，这一模型在临床症状、炎症因子表达、肠上皮破坏、肠通透性升高和病理组织学改变等方面均模拟了人类IBD的发病特征。我们进一步通过MLCK基因敲除小鼠探讨了IBD发生中肠上皮细胞MLCK表达的必要性。我们发现在疾病早期MLCK敲除后延迟了肠屏障功能缺失并减弱了IBD严重程度。炎症后期MLCK-/-RAG1-/-小鼠和RAG1-/-小鼠肠上皮凋亡细胞数无明显差别。这一结果表明敲除MLCK可使小鼠在疾病早期免于上皮细胞凋亡。为了明确以上观察到的MLCK敲除后的早期保护作用是肠上皮MLCK直接介导的，我们将MLCK-/-RAG1-/-肠上皮细胞重新表达组成性活化的MLCK（CA-MLCK），发现CA-MLCK/MLCK-/-RAG1-/-小鼠IBD发病时间提前，疾病程度加剧。这些结果提示，肠上皮细胞特异性表达MLCK逆转了MLCK敲除后对IBD的保护作用。我们进一步通过LIGHT CD4+T细胞过继转输诱导的IBD小鼠模型，证明了MLCK敲除后减轻了过继转输诱导的IBD症状。T细胞介导的炎症因素在IBD发病中的作用发挥着重要作用。干扰淋巴细胞活化亦可成为治疗IBD的另一途径。我们设想下调淋巴细胞中MLCK表达抑制IBD发生中的炎症反应。我们通过建立MLCK knock down嵌合小鼠，发现MLCK下调后， T 细胞发生了凋亡，提示MLCK调控了T细胞的存活，表明其介导的炎症也受到明显的抑制。研究表明TNF在Crohn’s disease发生中非常重要。为了进一步明确TNFR1和TNFR2在结肠炎发生中的作用，我们检测了IBD小鼠结肠上皮中TNFR1和TNFR2的表达和肠屏障功能，我们发现IBD小鼠结肠上皮中TNFR2的表达增高；TNFR2-/-RAG1-/-小鼠在15天时肠上皮通透性、体重下降、结肠上皮中MLCK表达和MLC磷酸化均低于TNFR1-/-RAG1-/-小鼠，表明TNFR2-依赖的MLCK表达上调是调控肠屏障功能缺失和结肠炎发生的一个重要因素。