Poly(I:C)增强树突状细胞来源exosomes抗HPV16感染的免疫原性研究
批准号:
81601444
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
20.0 万元
负责人:
陈仕胜
依托单位:
学科分类:
H1111.疫苗和免疫预防
结题年份:
2019
批准年份:
2016
项目状态:
已结题
项目参与者:
高宇、吕明芬、马新华、金宛宛、谷盈、全和和、陈安琪、陈婷、熊玲玲
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中文摘要
高危型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染与多种肿瘤密切相关,治疗性疫苗是治疗HPV相关疾病的有效手段。利用免疫佐剂是提高疫苗免疫原性的有效方法。课题组先前利用poly(I:C)显著提高了HPV16E7多肽疫苗的免疫原性。然而,poly(I:C)在体内稳定性差、靶向性不强。在体外用佐剂活化效应细胞是解决这些问题的明智选择之一。树突状细胞(DCs)是体内固有免疫和适应性免疫之间的纽带,强大的抗原呈递功能能诱导抗原特异性T细胞反应。DC来源的外泌体(exosomes)因含多种免疫分子,近年被广泛用来做免疫治疗。但目前疗效有限,可能由于缺乏其他必要的活化信号。本研究旨在利用Toll样受体激动剂联合HPV抗原肽在体外刺激活化DC细胞,通过收集DC细胞分泌的exosomes(Dex),体内外验证Dexo的免疫原性,考证Dexo的体内抗HPV感染效应,探索基于exosomes的HPV疫苗策略的可行性。
英文摘要
High-risk human papillomavirus (HPV) persisted infections are associated with a variety of malignant neoplasms. Therapeutic vaccination is an effective method for treating HPV related diseases. Using immune adjuvant can improve the immunogenicity of the vaccine effectively. we have approved the immunogenicity of HPV16E7 peptide vaccine increased by poly (I:C). However, the application of the adjuvant is restricted by its poor stability in the body, poor targeting performance. It is wise to stimulate the target cells using adjuvant in vitro.Dendritic cells are the ligament between the innate and adaptive immune system as powerful antigen-presenting cells capable of inducing antigen-specific T cell responses. DCs derived exosome(Dexo) being widely used for immune therapy because its contains several immunologically relevant components,But the efficacy is poor. we speculate it is lack of other necessary activation signals. This study aimed at using toll like receptor agonist combined with HPV antigen peptide to activate DCs in vitro, validation Dexo immunogenicity and anti-HPV infection effect in vitro and in vivo. To explore the feasibility of exosomes-based HPV vaccine strategies.
树突状细胞(DCs)来源的外泌体(Dexo)具有特异性抗肿瘤免疫效应。本课题首先单用联合Toll样受体激动剂(Poly(I:C))或人乳头瘤病毒16(HPV16)抗原肽(E7)或者联合二者在体外刺激活化C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs),通过超速离心法收集纯化BMDCs细胞分泌的外泌体,通过透射电镜分析外泌体的物理特征,流式细胞学分析鉴定Dexo表面标志,进一步用Western Blot分析外泌体膜上相关蛋白,证实Dexo来源于BMDCs。随后我们将不同刺激组的Dexo与CD8+T细胞共培养,检测CD8+T细胞的增殖情况,发现经Poly(I:C)联合HPV16E7抗原肽刺激组,CD8+T细胞增殖明显提高,其分泌的IFN-γ明显增多。同时发现,联合刺激后的CD8+T细胞对TC-1肿瘤细胞具有更强的细胞毒性。接着,我们把不同刺激方案的Dexo免疫C57BL/6小鼠,发现经Poly(I:C)联合HPV16E7抗原肽刺激的Dexo免疫小鼠的脾细胞的增殖,分泌细胞因子能力得到较大提高,对肿瘤细胞TC-1具有较强的细胞毒效应。随后,课题组比较了不同刺激组Dexo对荷瘤小鼠的治疗性免疫效果,发现Poly(I:C)联合HPV16E7抗原肽刺激的Dexo具有明显的抑制小鼠肿瘤生长,提高荷瘤小鼠的生产率。为了快速稳定的获得抗原肽刺激的Dexo,我们尝试了将HPV16E7蛋白直接转入BMDCs内,使BMDCs能表达外源E7蛋白的策略,下一步将继续优化方案。.综合上述结果,我们探索了基于外泌体的HPV感染治疗性疫苗的新策略,对如何优化Dexo的免疫原性进行了初步尝试。项目资助发表SCI收录论文一篇。项目投入经费20万元,支出15.2452万元,各项支出基本与预算相符。剩余经费4.7548万元。剩余经费计划用于本项目后续研究支出。
期刊论文列表
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Poly(I:C) enhanced anti-cervical cancer immunities induced by dendritic cells-derived exosomes
Poly(I:C) 增强树突状细胞衍生的外泌体诱导的抗宫颈癌免疫
DOI:10.1016/j.ijbiomac.2018.02.034
发表时间:2018-07-01
期刊:INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES
影响因子:8.2
作者:Chen, Shisheng;Lv, Mingfen;Xu, Yunsheng
通讯作者:Xu, Yunsheng
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