凝血因子Ⅷ、Ⅸ基因突变或缺陷可导致血友病A、B的发生，分泌凝血因子Ⅷ、Ⅸ的胚胎干细胞（ESC）源性肝细胞有望用于血友病的替代治疗。我们前期研究证明，丁酸钠联合细胞因子BMP-4和bFGF对小鼠ESC的肝系分化具有协同促进作用，并继而建立了一套新颖的诱导小鼠ESC分化为同时表达凝血因子Ⅷ、Ⅸ的肝细胞分化体系。但是对于诱导人源性ESC向能同时表达凝血因子Ⅷ和Ⅸ的成熟肝细胞分化，目前尚无报道。.基于上述研究现状和存在的问题，本项目在前期基础上进一步完成了以下研究内容：① 序贯采用Activin A、BMP-4+bFGF、HGF、OSM+Dex联合诱导的实验方案，定向诱导人ESC顺序分化为定型内胚层、肝前体细胞、成熟肝细胞，并从形态、基因、蛋白和功能四个方面证实分化获得细胞具有体外分泌凝血因子Ⅷ、Ⅸ及促进凝血的能力，从而建立了高效诱导人ESC分化为同时表达凝血因子Ⅷ、Ⅸ的肝细胞培养体系；②在体外研究的基础上，我们进一步将ESC源性表达凝血因子的肝细胞移植入凝血因子VIII缺乏的血友病A裸鼠模型体内，并检测了移植细胞在模型体内具有分泌凝血因子Ⅷ、Ⅸ的能力，同时改善了动物模型的凝血功能。