杜氏盐藻异养工程藻株的建立

克隆并鉴定人红细胞葡萄糖转运基因（Glut1）序列，将其克隆至本实验室构建的杜氏盐藻高效表达载体pHDun-EGFP,构建同源重组型杜氏盐藻异养转化载体pHDun-Glut1-EGFP。通过基因枪法，将上述构建的载体导入光合自养的杜氏盐藻硝酸盐还原酶（NR）营养缺陷型突变株中，在碳酸酐酶(CA)启动子控制下，以盐藻硝酸盐还原酶基因作为筛选标记，通过杜氏盐藻MAR序列介导进入杜氏盐藻核基因组中使之发生高频同源重组,使EGFP、Glut1得到表达,筛选稳定表达Glut1的盐藻转化株，从而建立杜氏盐藻异养株。制备Glut1的siRNA及构建siRNA表达载体,转化Glut1的盐藻稳定表达株，进行葡萄糖转运分析,进一步阐述Glut1基因在杜氏盐藻异养株中的功能。此研究有助于进一步探索杜氏盐藻自养株及异养株的代谢调控途径,提高杜氏盐藻的生长和繁殖速度,为杜氏盐藻生物反应器的建立奠定基础。