AJSAF对树突状细胞的调控作用及其信号转导机制研究

批准号：

31072165

项目类别：

面上项目

资助金额：

35.0 万元

负责人：

孙红祥

依托单位：

浙江大学

学科分类：

中兽医学

结题年份：

2013

批准年份：

2010

项目状态：

已结题

项目参与者：

施明华、许海顺、王慧、李富强、陈立青、王娟娟

关键词：

树突状细胞作用机制合欢皮皂苷免疫佐剂 PCR芯片

项目摘要

结项摘要

项目成果

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中文摘要

AJSAF系从中药合欢皮中筛选得到的佐剂活性皂苷组分。本项目采用HPLC-MS-MS分离鉴定AJSAF的皂苷成分；通过检测对小鼠树突状细胞(DC)表型、细胞因子和趋化因子分泌、吞噬功能、趋化功能、抗原提呈功能、对T细胞激活能力、以及对DC活化和成熟相关基因表达水平的影响，探讨AJSAF对小鼠DC活化和成熟的调控作用。并以定量实时PCR芯片检测对DC中TLR信号转导相关基因表达谱的影响，筛选出显著差异表达的基因，进行生物信息学分析，构建敏感基因间相互作用的网络，确定AJSAF调控的可能转导途径及潜在的关键基因。采用Western Blot、电泳迁移率实验、抗小鼠抗体、信号转导分子特异性抑制剂及RNA干扰技术，确定调控的关键基因，阐明AJSAF对DC调控作用的信号转导机制，为今后研究免疫佐剂分子新靶点及高通量筛选新颖免疫佐剂提供科学依据和技术支撑，促进天然药物免疫佐剂的研究。

英文摘要

AJSAF系从中药合欢皮中筛选得到的佐剂活性皂苷组分。本项目采用LC/ESI-Q-TOF-MS/MS鉴定了AJSAF中13个三萜皂苷化合物。通过检测对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)表型、细胞因子和趋化因子分泌能力、吞噬功能、抗原提呈功能、对T细胞的激活能力、以及对DCs活化和成熟相关基因表达水平的影响，评价了AJSAF对小鼠DCs活化和成熟的调控作用。同时，采用Agilent SurePrint G3小鼠表达谱芯片检测了AJSAF对BMDC细胞基因表达谱的影响，筛选出显著差异表达的mRNA和lncRNA，通过mRNA的GO分析和功能富集分析、lncRNA与mRNA关联分析、lncRNA的靶基因和转录因子预测，构建“lncRNA–转录因子–靶基因”三元组关系网络图，深入、系统地阐明了AJSAF对DCs调控作用的机制及信号转导特点，为今后研究免疫佐剂分子新靶点及高通量筛选新颖免疫佐剂提供科学依据和技术支撑，促进天然药物免疫佐剂的研究。

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