皂苷类免疫佐剂的定量构效关系及作用机制的蛋白质组学研究

前期从中药远志和桔梗中筛选分离到13个具有佐剂活性的齐墩果烷型皂苷。本项目针对皂苷佐剂构效关系研究中存在的问题及作用机制不明确的现状，检测13个皂苷的溶血性、急性毒性，以及对卵清蛋白和禽流感疫苗的佐剂活性，采用量子化学方法、分子连接性指数法并结合分子图形学技术表征分子结构，运用多元逐步回归分析和人工神经网络法对皂苷的佐剂活性和毒性进行定量构效关系研究，探讨影响活性的关键因素，确定分子的活性位点。采用蛋白质组学方法比较皂苷对免疫小鼠脾淋巴细胞蛋白质组表达的影响，鉴定差异表达蛋白质；运用反向分子对接程序虚拟筛选佐剂作用潜在的靶蛋白，并以表面等离子共振技术检测皂苷和潜在靶蛋白的相互作用，确定最终靶蛋白，构建功能蛋白质间相互作用的网络，阐明佐剂作用的分子机制。旨在为设计与合成高效、低毒的理想皂苷佐剂奠定理论基础和提供先导化合物，并为今后研究免疫佐剂分子新靶点及高通量筛选新颖免疫佐剂提供技术支撑。