基于PCR+GQ-HCR系统的冬虫夏草可视芯片研究及其对含冬虫夏草中成药的质量评价
结题报告
批准号:
81373961
项目类别:
面上项目
资助金额:
70.0 万元
负责人:
邓赟
依托单位:
学科分类:
H3204.中药质量评价
结题年份:
2017
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
张旭、崔欣、邓晶晶、李鸿翔、董娟、戴宇、王巍、宋川霞、陈红梅
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
客服二维码
微信扫码咨询
中文摘要
构建一种准确、简单、灵敏的中药特异性基因检测方法是破解当前中药材、特别是中成药掺假检测难题的有效途径。前期研究中,首次构建了以PCR+GQ-HCR为基础的快速、准确的基因检测方法,并首次实现了对中成药复杂剂型所含药材基因的检测。在此基础上,本课题针对冬虫夏草药材及其中成药掺假严重的情况,以冬虫夏草虫体和子座为研究对象,构建检测虫体和子座的特异性基因序列的PCR+GQ-HCR体系,并制备具有自主知识产权的冬虫夏草虫可视芯片;进行可视芯片检测中成药所含冬虫夏草特异性基因的研究,构建中成药制剂中冬虫夏草定性检测方法和与标准色板比对的半定量分析方法。用此方法将能准确、快速、低成本检测出冬虫夏草特异性基因,从而实现对冬虫夏草及成药的质量评价。同时,项目可推广到其它中药材和中成药,为中药的质量评价提供新的思路和方法。
英文摘要
Building an accurate, simple, sensitive specific gene detection system for traditional Chinese medicine is an effective way to solve the problem of adulteration detection in Chinese herbal medicines, especially in Chinese Patent Medicine(CPM).In preliminary study of the applicant, we constructed a rapid and accurate genetic testing method based on PCR+GQ-HCR system, and accomplished the detection to different forms of CPM for the first time. This application projects on the basis of the above work, aiming at serious adulteration situations of Cordyceps sinensis and its CPM, taking Cordyceps sinensis worm and stroma as the object of study, is to constructed the PCR GQ-HCR system for the detection of specific gene sequences in the worm and the stroma, and to prepare Cordyceps sinensis visual- chip. Furthermore, the study of Cordyceps sinensis specific gene detection through visible-chip in Chinese patent medicine will be conducted, a qualitative detection to the Cordyceps sinensis in CPM and a semi-quantitative analysis with stadard colorimetric card will be accomplished . Through this way, it can realize the the accurate, fast, low-cost detection of the Cordyceps sinensis specific genes, and can achieve the quality evaluation of Cordyceps sinensis and its Chinese patent medicine. At the same time, the technology can provide new ideas and methods for quality evaluation of other Chinese herbal medicines and Chinese patent medicine.
当前,以化学成分检测为主的质量标准难以完全有效地评价中药的质量,中药存在着现有检测方法难以发现的参伪制假情况。而基因检测反映物种基因组中具有差异特征的DNA片段,不受药材生长地域、采摘时间、炮制方法等因素的影响,能准确鉴定真、伪品。本项目选取参伪严重的冬虫夏草为研究对象,将基因检测的技术应用于构建冬虫夏草的真伪鉴别和定量检测方法。.项目采用位点特异性PCR技术,针对冬虫夏草正品和伪品各自的ITS区设计特异性引物,建立了基于PCR技术对冬虫夏草及其常见伪品(亚香棒虫草、蛹虫草、新疆虫草和凉山虫草)的真伪性鉴定方法。在此基础上,进一步构建了基于多重PCR扩增技术的冬虫夏草及其常见伪品的快速鉴定方法,对最常见的多种伪品进行一次性排查,实现仅需单个PCR反应就能对冬虫夏草及其常见伪品的同时快速检测。项目基于核酸探针和Lambda外切酶的可视化检测方法,设计出检测冬虫夏草基因的比色探针(该探针包含G-四链体序列、发夹封闭序列,以及能够与冬虫夏草PCR产物互补的序列),进行显色体系的构建研究,建立了冬虫夏草真伪鉴别的可视化方法。该方法可实现PCR后不通过凝胶电泳成像,仅通过目视观察显色即可鉴别冬虫夏草的真伪。项目在定性鉴别的基础上,采用实时荧光定量PCR技术,在PCR反应体系中加入荧光物质-SYBRGreenⅠ,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,以不同重量的冬虫夏草粉末提取的DNA作为模板,获得标准曲线,从而对待测冬虫夏草进行定量分析。.项目还将建立的定性定量方法拓展应用于其它中药的检测中,构建了半夏及其伪品的快速基因可视化鉴定方法,藿香正气水(液)中半夏及其伪品水半夏的基因检测方法,基于PCR的半夏水煎液中半夏药材定量检测方法,还实现了全天麻胶囊中天麻参伪的鉴定和基于位点特异性PCR技术的贝母药材的鉴别。.项目研究成果对于冬虫夏草的检测具有重要意义,而且能应用于其它中药的质量评价,具有示范和推广价值。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Weigh Biomaterials by Quantifying Species-specific DNA with Real-time PCR.
通过实时 PCR 定量物种特异性 DNA 来称重生物材料
DOI:10.1038/s41598-017-05083-9
发表时间:2017-07-06
期刊:Scientific reports
影响因子:4.6
作者:Chen R;Wang J;Yuan Y;Deng Y;Lai X;Du F;Dong J;Huang X;Cui X;Tang Z
通讯作者:Tang Z
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2016.04.027
发表时间:2016
期刊:中药材
影响因子:--
作者:吴成丽;陈蓉;王巍;秦少容;余佳文;唐卓;邓赟
通讯作者:邓赟
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2016.03.020
发表时间:2016
期刊:中药材
影响因子:--
作者:康敏;王泽宇;郭大乐;胡佳;周燕;丁立生;邓赟
通讯作者:邓赟
Two Diarylundecanones Isolated from Ardisia tenera
从紫金牛中分离出两种二芳基十一烷酮
DOI:10.1177/1934578x1701200920
发表时间:2017-09
期刊:NATURAL PRODUCT COMMUNICATIONS
影响因子:1.8
作者:Lu Chong-Yu;Li Hong-Xiang;Li Sha;Qiu Ling;Yu Si;Cao Zhi-Xing;Guo Da-Le;Deng Yun
通讯作者:Deng Yun
Cytotoxic monoterpenoid indole alkaloids isolated from the barks of Voacanga africana Staph.
从 Voacanga africana Staph 的树皮中分离出细胞毒性单萜吲哚生物碱。
DOI:10.1080/14786419.2015.1046132
发表时间:2016-05-18
期刊:NATURAL PRODUCT RESEARCH
影响因子:2.2
作者:Chen, Hong-Mei;Yang, Yu-Ting;Deng, Yun
通讯作者:Deng, Yun
基于靶向PD-1/PD-L1配体垂钓的冬虫夏草抗肿瘤药效物质基础研究
  • 批准号:
    81973460
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    55.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    邓赟
  • 依托单位:
基于DNA编码技术的川产黄连治疗糖尿病作用机制研究及创新药物发现
  • 批准号:
    U19A2011
  • 项目类别:
    联合基金项目
  • 资助金额:
    247.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    邓赟
  • 依托单位:
国内基金
海外基金