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诱导排卵因子OIF/βNGF介导PAK1促进双峰驼LH生成和诱导排卵的分子机理

批准号:
32060821
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
35.0 万元
负责人:
赵兴绪
依托单位:
学科分类:
临床兽医学
结题年份:
2024
批准年份:
2020
项目状态:
已结题
项目参与者:
赵兴绪

项目摘要

结项摘要

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中文摘要
目前双峰驼独特的繁殖机理—精清诱导排卵机制尚不完全清楚。我们前期的研究结果表明精清OIF/βNGF可诱导母驼产生LH排卵峰并促进其排卵,且诱导后母驼性腺轴组织和血液中PAK1表达显著上调,据此推测精清OIF/βNGF介导PAK1促进LH生成和诱导排卵,但其具体作用机制尚不清楚。本研究拟建立精清OIF/βNGF诱导母驼排卵模型,阐明PAK1表达与LH生成和诱导排卵的相关性;随后建立过表达/敲低PAK1细胞模型,联合精清OIF/βNGF诱导,解析PAK1促进LH生成的分子机理;最后家兔卵巢活体转染过表达和敲低PAK1载体,建立家兔诱导排卵模型验证OIF/βNGF介导PAK1促进LH生成和诱导排卵的作用机制。本研究将有助于揭示双峰驼诱导排卵的分子机理,为双峰驼及其他诱导排卵型动物繁殖机理的研究提供重要依据。
英文摘要
The unique reproductive mechanism of ovulation induced by seminal plasma in bactrian camel is not properly appreciated. Our previous study showed that OIF/βNGF in seminal plasma could induce the female camel to produce LH peak and promote its ovulation. And the expression level of PAK1 in the gonadal axis and blood of the female camel was significantly up-regulated after induction by OIF/βNGF. We hypothesized that OIF/ NGF promotes LH generation and ovulation induction via mediated PAK1, however the specific mechanism of this process is still unknown. In the present study, the ovulation model induced by OIF/βNGF will be constructed for elucidating the correlation between PAK1 expression and LH generation and ovulation induction. Subsequently, different cell models of PAK1 over-expression or knock down combined with OIF/βNGF inducing will be constructed for illuminating the molecular mechanism of PAK1 promoting LH generation. Finally, transfected these vectors to rabbit ovaries in vivo and constructed the rabbit ovulation induction model for validating the mechanism of PAK1 promoting LH generation and ovulation induction. This study will help to reveal the molecular mechanism of ovulation induction in bactrian camel and other ovulation-inducing animals.
双峰驼是我国荒漠及半荒漠地区特有的畜种资源,具有重要的经济和科研价值。然而,由于其严格的季节性发情及诱导排卵特性,其繁殖性能较低。本研究围绕诱导排卵因子(OIF/βNGF)和PAK1信号通路的分子机制展开,探讨了其对双峰驼LH生成及排卵的调控作用,同时结合三个年度研究进展内容,系统揭示了双峰驼生殖调控的分子基础。在研究中,通过基因克隆、生物信息学分析、组织表达定位及代谢组学方法,进一步深化了对OIF/βNGF、APOD、HSP60、CCKBR等关键分子的功能理解。研究表明,OIF/βNGF通过激活PAK1信号通路促进LH生成,LH浓度较对照组提高约2倍(P<0.01),显著诱导排卵。在此基础上,通过对APOD的研究,发现其在发情期和乏情期附睾中表达显著差异,乏情期附睾头、体和尾的mRNA水平分别为发情期的2倍以上(P<0.01),表明其通过调控附睾功能参与精子成熟过程。针对HSP60基因的分析显示,其在性成熟后的睾丸中表达水平较幼龄阶段增加3倍以上,同时在排卵前后卵巢和子宫中的表达动态变化,表明其可能在精子生成和诱导排卵过程中发挥关键作用。CCKBR基因的研究揭示,其在发情期和乏情期的睾丸及附睾中的表达存在显著差异,尤其在乏情期附睾头和尾的表达水平较发情期高出约1.5倍,表明其可能通过调控精子成熟及行为节律参与季节性发情。此外,通过对双峰驼颈腺的代谢组学和蛋白组学分析,鉴定出与类固醇合成和神经代谢相关的关键代谢物,为雄性双峰驼发情行为的调控提供了生物化学依据。在研究工作中还完成了双峰驼颈腺的解剖学及组织学结构观察,发现其为改良大汗腺,发情期腺体显著活跃;通过GC-MS和LC-MS技术分析颈腺分泌物,筛选出1000余个差异代谢物;并利用蛋白质组学明确了颈腺组织中与类固醇相关的多个功能蛋白和调控通路。这些研究系统揭示了双峰驼生殖调控和季节性发情的分子机制,深化了对OIF/βNGF、APOD、HSP60及CCKBR等关键分子的功能理解,为优化双峰驼的繁殖管理提供了科学依据,并为其他季节性发情动物的生殖调控研究提供了重要参考。
双峰驼精清诱导排卵的分子调控机理
  • 批准号:
    31760753
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    42.0万元
  • 批准年份:
    2017
  • 负责人:
    赵兴绪
  • 依托单位:
孕骆驼血清促性腺激素的生物学活性及分离纯化
  • 批准号:
    39400097
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    7.0万元
  • 批准年份:
    1994
  • 负责人:
    赵兴绪
  • 依托单位:
国内基金
海外基金