游仆虫细胞性成熟相关基因的筛选和功能研究

本项目以小腔游仆虫（Euplotes adiculadus）为实验动物，研究原生动物有性生殖发生的分子生物学机制。在项目研究中构建了小腔游仆虫成熟细胞和未成熟细胞的基因表达文库，并通过消减杂交实验筛选出与游仆虫细胞（性）成熟可能相关的候选基因十余个。通过这些基因的序列分析及表达曲线的特征分析，研究组对克隆1-2-13和克隆2-24进行深入研究，获得它们的全长DNA和cDNA序列、通过体外表达获得其纯化蛋白进行动物免疫制备抗体。通过基因操作技术构建了含有α-tubulin非编码序列和emat-1基因编码区与DsRed编码序列（红色荧光蛋白)嵌合的重组微染色体。并进行了显微注射实验将该重组染色体注射到小腔游仆虫大核中进行基因干扰试验，以期验证其与细胞成熟的功能相关性。遗憾的是在项目后期，由于长期传代培养，近期实验动物游仆虫出现衰老现象，细胞小核丢失，不能完成结合生殖。对未来实验进展影响较大。经与国际同行多方联系，均未能能获得正常细胞株予以替代。没能对上述基因进行更加深入的研究。项目期间发表论文1篇。