具有RCC1和ANK结构域的香菇转录本表达蛋白Latcripin-4诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究

批准号:
81301955
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
钟民涛
依托单位:
学科分类:
H1819.肿瘤生物治疗
结题年份:
2016
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
刘奔、曹婧、刘欣、李星云、邓国英、杨淑凤、王佳、杜忠娟、黄敏
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中文摘要
目前研究中对具有抗肿瘤真菌蛋白的临床试验或实际应用的报道还很少,抗肿瘤真菌蛋白及其作用靶点的研究具有广大的开发空间和挖掘潜力。为开发香菇菌C91-3中抗肿瘤蛋白,本课题组对香菇菌C91-3转录组进行了Solexa高通量测序,获得了香菇菌C91-3的转录组基因序列及其功能注释。拟通过筛选,比对及RACE方法获得Latcripin-4基因全长。再经过基因 克隆并诱导高效原核表达系统获得蛋白Latcripin-4,通过鉴定Latcripin-4抗肿瘤活性,以及检测Caspase3、8、9,PI3K,Bcl-2等凋亡相关指标,初步确定Latcripin-4在诱导肿瘤细胞凋亡通路作用中的分子机制;阐述Latcripin-4蛋白诱导细胞凋亡作用的抗肿瘤分子机制,为寻求新的毒副作用小、靶向作用强的肿瘤治疗蛋白药物开辟新的途径。
英文摘要
Cancer has become the most serious disease threatening the health of human beings. the anti-tumor fungal proteins have showed their great effect and potential, but the study of the anti-tumor fungal protein rarely reported in clinical trials or the practical application. To identify and develop the anti-tumor protein in Lentinula edodes C91-3, we conducted a high-throughput transcriptome sequencing experiment to obtain Lentinula edodes C91-3 transcriptome sequences. Through a comprehensive bioinformatics analysis, we preliminarily screened the transcriptome sequence which is correlated to antitumor activity . According to the transcriptome sequence, the full-length gene of Latcripin-4 was obtained by 3',5'-Full RACE (Rapid Amplificatioon of cDNA Ends) method. We induced and expressed the protein Latcripin-4 with Prokaryotic expression system. Through identifying anti-tumor activity of Latcripin-4 and detecting the indexes(Caspase3、 8、9, PI3K, Bcl-2), the molecular mechanism will be initially identified in the apoptosis pathway which Latcripin-4 induced the tumor cell.Finally, we try to illuminate the molecular mechanisms of Latcripin-4 protein on inducing cancer cell apoptosis, which will bring new insights and advantages in founding effective anti-tumor protein medicine.
目前研究中对具有抗肿瘤真菌蛋白的临床试验或实际应用的报道还很少,抗肿瘤真菌蛋白及其作用靶点的研究具有广大的开发空间和挖掘潜力。为开发香菇菌C91-3中抗肿瘤蛋白,本课题组对香菇菌C91-3转录组进行了Solexa高通量测序,获得了香菇菌C91-3的转录组基因序列及其功能注释。通过生物信息学方法的筛选,比对及RACE方法获得Latcripin-4基因全长,生物信息学软件分析得到Latcripin-4功能结构域信息,发现该蛋白包含有多个染色体浓缩调节蛋白结构域(RCC1)和锚重复序列结构域(ANK)。再经过基因克隆并诱导高效原核表达系统获得Latcripin-4结构域蛋白,并且LP4-RCC1+ANK蛋白以包涵体的形式存在。磁珠纯化法成功获得纯度较高的LP4-RCC1+ANK蛋白。BCA法测定目的蛋白浓度。CCK8法检测LP4-RCC1+ANK蛋白复性后的生物学活性,结果显示LP4-RCC1+ANK蛋白对人肝癌HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性和时间依赖性;透射电镜结果显示LP4-RCC1+ANK蛋白作用24 h后的人肝癌HepG2细胞可见明显的细胞凋亡现象,而对照组细胞结构正常。姬姆萨染色结果显示,不同浓度的蛋白作用24h后的人肝癌HepG2细胞与对照组细胞相比,均出现调亡现象。Hoechst33258染色后荧光显微镜结果显示, LP4-RCC1+ANK蛋白作用组中可见凋亡的HepG2细胞,而对照组中未见。cck8法检测细胞毒性实验结果显示LP4-RCC1+ANK蛋白对正常人永生化表皮细胞无毒性作用。 并初步探讨Latcripin-4在诱导肿瘤细胞凋亡通路作用中的分子机制,为寻求新的毒副作用小、靶向作用强的肿瘤治疗蛋白药物开辟新的途径。
期刊论文列表
专著列表
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会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2015
期刊:微生物学杂志
影响因子:--
作者:李星云;曹婧;宁安红;黄敏
通讯作者:黄敏
DOI:--
发表时间:2014
期刊:微生物学杂志
影响因子:--
作者:黄敏;钟民涛
通讯作者:钟民涛
DOI:--
发表时间:--
期刊:大连医科大学学报
影响因子:--
作者:李星云;曹靖;宁安红;黄敏
通讯作者:黄敏
In vitro antitumor activity of Latcripin-15 regulator of chromosome condensation 1 domain protein.
Latcripin-15 染色体浓缩 1 结构域调节蛋白的体外抗肿瘤活性。
DOI:10.3892/ol.2016.5106
发表时间:2016-11
期刊:Oncology letters
影响因子:2.9
作者:Tian L;Wang X;Li X;Liu B;Zhang W;Cao J;Ning A;Huang M;Zhong M
通讯作者:Zhong M
DOI:--
发表时间:2016
期刊:中国微生态学杂志
影响因子:--
作者:曹婧;宁安红;黄敏;钟民涛
通讯作者:钟民涛
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