MALAT-1 RNA诱导细胞恶性转化的作用机制研究

我们发现MALAT1 RNA中有1个293nt的区域（M1）可以与PSF蛋白相互作用。为验证M1 RNA与PSF蛋白结合对细胞增殖及肿瘤生成的影响，在小鼠正常成纤维细胞NIH/3T3和人黑色素瘤细胞yusac中过表达M1。通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成及裸鼠体内成瘤实验，发现NIH/3T3-M1比对照细胞增殖速度快，发生了恶性转化并能在软琼脂上形成集落和裸鼠体内形成肿瘤；yusac-M1细胞的恶性化程度升高，和对照细胞相比在软琼脂上形成更大和更多的集落。采用shRNA方法构建了低表达M1 RNA的稳定细胞株yusac-M1 shRNA，细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验表明，yusac-M1 shRNA细胞恶性化程度降低，比对照细胞更慢在软琼脂上形成集落。.为了研究与PSF蛋白结合的MALAT-1 lncRNA片段M1 RNA造成细胞恶性转化的原因，我们进行了染色质免疫共沉淀实验和半定量RT-PCR实验，结果显示M1 RNA能使PSF蛋白从与之结合的原癌基因GAGE6启动子区解离，M1 RNA高表达能促进GAGE6转录；相反地，M1 RNA低表达能抑制GAGE6转录。.多聚嘧啶结合蛋白(Polypyrimidine tract binding protein，PTB)可以调控基因可变剪接，影响细胞的发育、分化和癌症产生。已有的研究指出，定位于MALAT-1的RNA片段能与PTB蛋白结合，而PSF蛋白又是PTB蛋白相关剪接因子。为了验证MALAT-1 RNA、PSF蛋白和PTB蛋白的相互作用关系，我们运用蛋白质免疫共沉淀实方法，证明了内源性PSF蛋白与PTB蛋白的相互作用是靠RNA连接在一起的。通过RNA免疫共沉淀实验，发现了与PTB蛋白结合的MALAT-1特定序列M3。实验结果显示， MALAT-1 RNA上不同位置分别与PSF蛋白和PTB蛋白结合。PSF蛋白通过MALAT-1 RNA的介导调控PTB蛋白控制的RNA可变剪切。目前还没有任何其它关于蛋白通过ncRNA介导调控另一蛋白控制的RNA可变剪切的报道。.目前已发表2篇SCI论文，另外还有2篇论文（有标注）分别投到Science、JGG。