大鼠急性心肌缺血早期基因标记物筛选及功能研究

课题组前期运用抑制消减杂交筛选了大鼠急性心肌缺血1小时的差异表达基因，发现了四个可能与心肌缺血有关的已知基因（Basigin、Cathepsin L、Sjogren syndrome antigen B和Unc-45 homolog A）和七个未知序列表达标签EST。本课题运用免疫组化、western blot、原位杂交和实时荧光定量PCR等方法进一步验证这些基因在大鼠急性心肌缺血中的作用。研究发现，大鼠急性心肌缺血后Bsg、Cathepsin L、SS-B和Unc45a mRNA表达均呈下降趋势。与0 min缺血心肌(EIM)及正常对照心肌(NOM)组相比，Basigin mRNA 在心肌持续缺血15min-240min的表达显著降低(P <0.05)，持续缺血30min-240min，缺血心肌(EIM)的表达量较非缺血心肌(NIM) 明显降低(P<0.05)。CathepsinL在急性心肌缺血120min时间点的表达明显降低，与30min和60 min时间点相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。SSB基因在急性心肌缺血120min，与心肌缺血0min及正常对照组相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。UNC45 a mRNA在心肌缺血30min、60min和120min组表达明显降低，与正常组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。心肌缺血1小时后， SSB蛋白表达亦明显降低，与心肌缺血0分钟相比，SSB蛋白在1小时和6小时的表达差异具有统计学意义（P＜0.05）。Basigin蛋白在缺血心肌(EIM)表达较0 min缺血心肌(EIM)、非缺血心肌(NIM)和正常对照心肌(NOM)增高2倍左右(P<0.05)。此外，成功制备了兔抗Unc45 a多克隆抗体。前期筛选出的未知EST序列为UGP2，免疫组化和免疫印迹结果显示UGP2 mRNA和蛋白在急性心肌缺血后均呈低表达。这些研究结果提示，Bsg、Cathepsin L、SS-B、Unc45a和UGP2有望成为急性心肌缺血早期的生物学标记物，在心源性猝死，尤其是发病急促、无明确组织病理学改变的法医学鉴定中具有潜在的应用价值。