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排卵后卵子老化对子代印迹基因甲基化影响的研究
结题报告
批准号:
81100422
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
14.0 万元
负责人:
梁兴伟
学科分类:
H0413.卵母细胞发育、成熟、受精及其异常
结题年份:
2012
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
张清华、郭磊、李森、葛照嘉、蒋宗哲
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中文摘要
老化卵子的受精和发育是困扰人类自然生殖及辅助生殖技术的难题。研究表明卵子老化对亲代(F0)及子代(F1和F2)的健康和生殖有不利影响。尽管基因组印迹与胎儿的生长发育及后代健康关系密切,但目前尚不明确卵子老化对基因组印迹的长期影响。结合卵子老化造成的不良影响以及印迹基因发挥的重要功能,再加上该实验室研究发现卵子老化导致卵子印迹基因甲基化丢失,我们假设卵子老化长期影响基因组印迹的稳定。本课题采用多种技术手段检测卵子老化对F0代妊娠中期胎儿和胎盘印迹基因的甲基化及表达水平;检测老化卵子对所得F1和F2代卵子印迹基因甲基化状态,并进一步检测这些卵子甲基化转移酶的表达水平。实验结果不仅有助于认识卵子老化对基因组印迹的长期影响,为揭示卵子老化与子代异常的关系提供表观遗传学依据,而且对提高辅助生殖技术的效率和安全性,促进优生优育,提高人口素质都有重要理论和实践意义。
英文摘要
卵子在排放后的老化过程质量下降,其后果是造成受精之后的发育潜能降低,且影响连续两个子代的健康和繁殖性能。印迹基因对胎儿的生长发育及胎盘功能起到很关键的作用,是生殖成功的重要保证。我们以前的实验以及其他研究者都证实了卵子老化过程中发生印迹基因甲基化发生异常。本研究我们探讨卵子老化对妊娠中期胎儿和胎盘印迹基因甲基化及表达水平的影响;以及对后代卵子DNA甲基化印迹建立/维持的影响。.首先,我们评价排卵后卵子老化对小鼠妊娠中期印迹基因甲基化模式和表达的影响。给处于发情前期的雌鼠注射hCG,并在注射hCG 13(新鲜卵子组)或22小时(老化卵子组)后,对雌鼠实施人工授精,获得新鲜和老化卵子的妊娠雌鼠。发情雌鼠与雄鼠自然交配作为对照组。在妊娠的10.5天,分别收集胚胎和胎盘,并提取这些组织的DNA和RNA。分别通过甲基化定量分析PCR(qAMP)和实时定量PCR方法分析Igf2r 和 H19的甲基化模式及mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,无论是人工授精新鲜卵子还是老化卵子的雌鼠,妊娠10.5天胎儿和胎盘组织中Igf2r差异甲基化区(DMR)的甲基化模式和mRNA表达水平都没有显著变化,胎儿组织中H19的甲基化模式也没有显著变化。相比之下,老化卵子胎盘组织中H19 DMR甲基化水平显著降低,并且伴随着该基因表达水平的显著升高。我们的结果表明,小鼠排卵后卵子老化对所得妊娠中期胎盘中H19的甲基化和表达水平产生不利影响。.接着,为了进一步探讨母亲卵子发生排卵后老化是否影响所得后代卵子印迹基因甲基化模式的建立或维持, 我们收集新鲜卵子和老化卵子F1代的卵子,同时使用重亚硫酸盐联合内切酶法(COBRA)和重亚硫酸盐测序法(BS)检测这些卵子母本印迹基因Peg3, Snrpn和Peg1,以及父本印迹基因H19差异甲基化区域(DMR)的甲基化状态。我们的结果显示,除了非常少数卵子的Peg3DMR发生异常之外,所检测老化卵子后代卵子的Peg3, Snrpn, Peg1和H19基本上能够正确获得DNA甲基化印迹。这表明尽管卵子老化降低繁殖性能,但它并不显著影响存活后代卵子印迹基因甲基化印迹的获得。
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DOI:--
发表时间:2012
期刊:Science China Life Sciences
影响因子:--
作者:Liang XingWei;Ma JunYu;Schatten, Heide;Sun QingYuan;
通讯作者:
Effect of postovulatory oocyte aging on DNA methylation imprinting acquisition in offspring oocytes
排卵后卵母细胞衰老对子代卵母细胞DNA甲基化印记获得的影响
DOI:10.1016/j.fertnstert.2011.09.022
发表时间:2011-12-01
期刊:FERTILITY AND STERILITY
影响因子:6.7
作者:Liang, Xing-Wei;Ge, Zhao-Jia;Sun, Qing-Yuan
通讯作者:Sun, Qing-Yuan
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