细胞外钙感受器和Caveolin-1相互作用对eNOS活性影响

我们前期研究发现［Ca2+］0升高引起人脐静脉内皮细胞（HUVEC）eNOS活性和NO生成增加，伴有CaR和Cav-1mRNA高表达，提示在血管系统NO生成中，CaR和Cav-1可能有某种功能上联系。本研究分别用CaR激动剂、拮抗剂或caveolae结构抑制剂处理HUVEC，配合siRNA技术沉默CaR、Cav-1基因，用实时定量Rt-PCR、免疫印记、免疫荧光定位、免疫共沉淀方法检测不同处理因素对Cav-1、CaRmRNA和蛋白表达、eNOS转位、磷酸化、eNOS/Cav-1、CaR和Cav-1在细胞内共定位及相互结合影响；用3H-精氨酸转化法、DAF-FM荧光法、Fluo-3/AM 负载方法同步测定eNOS活性、NO生成和[Ca2+]i变化,阐明CaR和Cav-1在细胞外钙调节eNOS活性中作用，证实两者相互作用对eNOS活性影响，从多基因或蛋白交互作用角度阐明eNOS活性调节机制。