利用硫化叶菌异源表达超嗜热古菌重组蛋白的研究

古菌是生物界三域之一，超嗜热古菌可作为重要的工业用酶资源，也是研究基本生命过程如DNA复制、修复和重组的理想模式生物。目前古菌蛋白质的大量获得主要是通过在细菌和酵母中异源表达来实现的，然而以这种方式仍有相当大比例不能得到可溶性表达，或表达的蛋白没有预期的活性。其原因是细菌和酵母缺乏古菌蛋白正确折叠所需要的辅助因子，或这些蛋白质的稳定需要结构和功能关联的因子。近几年来，国际上已经建立起几个有效的古菌遗传转化系统。本研究将利用Albers和Schleper等建立起来的硫化叶菌蛋白质表达体系，表达通常难溶的炽热球菌(Pyrococcus)和硫化叶菌(Sulfolobus)嗜热淀粉酶，解决这些蛋白的难溶性表达问题；同时表达带有His标签的可溶的古菌重组修复蛋白HerA和RecQ，并以这些标签蛋白为诱饵，获得与之关联的蛋白因子或蛋白复合体，为古菌嗜热酶的利用、古菌DNA代谢研究提供材料和开辟新途径。