鹦鹉热嗜衣原体T3SS效应蛋白的筛选与鉴定及功能研究

鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydia psittaci，Cps）是一种严格胞内寄生，多宿主性的人兽共患性疾病病原体，现代医疗仍缺乏有效的防治药物。寻找新的Cps和宿主细胞相互作用的关键效应蛋白，作为设计防治性药物的靶点已成为医学界研究的"热点"课题。现有资料表明Ⅲ型分泌系统（T3SS）效应蛋白是Cps与宿主细胞相互作用的关键。本课题组在Cps基因组部分测序及注释的基础上，以T3SS为切入点，应用生物信息学、比较基因组学预测T3SS效应蛋白编码基因，采用间接免疫荧光技术直接定位及T3SS抑制剂等筛选并鉴定Cps T3SS效应蛋白；进一步对其功能进行初步研究；并探讨该内源性蛋白在感染细胞中表达时程及相互作用模式。结果显示：预测了可能的29个CPS效应蛋白编码基因。 CPSIT_0594 、CPSIT_p8等蛋白主要定位于包涵体内，属菌体蛋白范畴；CPSIT_0844、CPSIT_0846 位于包涵体膜。CPSIT_p7为T3SS分泌蛋白，通过JNK/MAPKs和ERK/MAPKs信号传导途径诱导THP-1细胞产生IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α炎症因子。CPSIT_0271 可能是衣原体在感染晚期表达的基因，该蛋白能促进THP-1细胞分泌炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β。CPSIT_0959可能是感染中期表达的基因，该蛋白具有半胱氨酸脱硫酶的活性，可能参与了衣原体内铁硫簇的生物合成。CPSIT_0846、CPSIT_p8蛋白可使免疫小鼠产生特异性免疫应答，对小鼠抗Cps感染具有较好的免疫保护效果，有望应用于诊断试剂盒和疫苗的研发。本项目的开展将进一步揭示衣原体和真核细胞相互作用的分子机制，从而为确定关键蛋白靶向药物防治Cps感染性疾病提供新的思路。