利用transgenic RNAi技术在家蚕滞育种中抑制核型多角体病毒复制增殖的研究

选用家蚕肌动蛋白A4启动子、BmNPV病毒ie-1基因启动子、IE1结合hr3增强子的启动子与BmNPV病毒复制必需基因ie-1, helicase, vp39, 病毒囊膜糖蛋白基因gp64进行多重组合，选用功能性内含子连接靶标基因正反向片段，基于piggyBac转座子载体,构建多个病毒转基因干扰载体，并以生产现行滞育蚕种两广2号母种“932”作为转基因受体材料，通过显微注射获得相应的转基因株系，筛选能高效抑制BmNPV复制增殖的转基因株系对应的干扰载体。后期抗病毒能力测试结果显示，不同的病毒干扰载体获得的转基因家蚕，其抗病毒能力均得到了一定程度的提高，转基因株系的死亡率最高可减少30%；在这之中，干扰载体中靶标基因以 “头对头”的连接方式优于“尾对尾”的连接方式，耦合Hr3片段的IE1启动子优于IE1和A4启动子，IE1基因是最佳的候选靶标基因。在完成好项目任务之外，项目组还通过转基因增量表达抗病毒蛋白脂肪酶1和美国白蛾NPV病毒hycu-ep32基因，成功增强了家蚕对BmNPV病毒的抵抗力。研究结果说明，通过RNA干扰和增量表达抗病毒蛋白均能较好的提高家蚕对病毒的抵抗能力，是基于基因工程培育抗病品种的可行方法。此外，项目组也对家蚕抵御病毒的机制进行了初步探索，研究结果初步表明RNA silencing基因网络是家蚕抵御病毒的途径之一。