DNA修复蛋白及其基因启动子甲基化与涎腺腺样囊性癌化疗耐药性研究

唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）化疗敏感性差是导致患者远期生存率低的因素之一。本研究分别对腺样囊性癌患者的临床病理特征进行了分析，利用免疫组织化学和甲基化特异性PCR（MSP）的方法检测51例未经放化疗的原发病例的组织学标本中hMLH1、MGMT蛋白表达水平及基因启动子甲基化状况。应用MSP和Western blot法检测体外培养的腺样囊性癌细胞系SACC-83和SACC-LM中hMLH1、MGMT启动子甲基化状况及其蛋白表达情况。应用甲基化转移酶抑制剂Decitabine（DAC）、顺铂、MGMT抑制剂O6-苄基鸟嘌呤（O6-benzylguanine，O6-BG）及氮芥处理体外培养的SACC-83和SACC-LM肿瘤细胞后，检测四种药物对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50。Real Time PCR、Western blot法和流式细胞技术法检测用药前后SACC-83和SACC-LM细胞mRNA、蛋白表达及细胞周期和凋亡的变化。MTT法分别检测DAC、顺铂与O6-BG、氮芥单独/联合使用时活细胞数量的变化。利用SACC-83细胞建立荷瘤鼠模型，DAC和顺铂单独/联合处理荷瘤鼠模型，测量肿瘤大小变化。研究结果显示：普通化疗不能改善腺样囊性癌患者的生存率。51例SACC组织标本中hMLH1的表达与组织学分级、TNM分期显著相关（P＜0.05），MGMT的表达与组织学分级显著相关（P＜0.05）；28例（55%）检测到hMLH1基因启动子甲基化，3例（6%）检测到MGMT的甲基化。SACC-83和SACC-LM中存在hMLH1基因启动子甲基化，同时检测到hMLH1蛋白表达。DAC处理细胞前后hMLH1 mRNA和蛋白表达水平有明显变化，用药后细胞周期S期明显阻滞， DAC和顺铂与O6-BG和卡氮芥联合应用比分别单独使用时活细胞数量明显减少。DAC、顺铂单独/联合处理荷瘤鼠模型发现，两种药物联合使用肿瘤体积小于两种药物单独使用。本研究结果表明，腺样囊性癌对普通化疗药物不敏感，hMLH1的高表达与患者预后差相关。通过抑制DNA修复蛋白和活性可增加腺样囊性癌细胞对化疗的敏感性，抑制肿瘤的生长。研究结果为这一肿瘤的化疗药物选择、预后及疗效预测、抑制DNA修复作为提高化疗效果的潜在辅助治疗手段提供新思路。