新基因mcpr1在腭裂形成中对腭突间充质细胞增殖与凋亡的调控研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30901691
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
20.0万
负责人：
轩东英
依托单位：
南方医科大学
学科分类：
H1501.口腔颅颌面组织器官生长发育相关疾病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
章锦才；刘长虹；谢成婕；戚威娟；黄雁红；谢宝仪；高峰；
关键词：
Mcpr1基因细胞增殖凋亡腭突间充质细胞

项目摘要

Mcpr1新基因是通过消减正常和RA诱导的小鼠腭裂模型的腭突组织获得，提示与腭突的发生发育高度相关。前期研究表明Mcpr1是RA介导的基因调控网络中的上调靶因子，阻滞MEPM细胞由G1期到S期过渡，并促进细胞凋亡。但是Mcpr1新基因是否在腭裂发生中具有特异调控作用尚未能明确，抑制细胞增殖及促进凋亡的作用机理尚不清楚。目前Mcpr1基因的相关研究仍停留在探究对不同种类细胞生物学行为的影响，尚未涉及探索通过何种机制以及哪些信号分子抑制细胞增殖以及促进凋亡。本研究在前期研究基础上，从Mcpr1基因与一些细胞周期调控因子及增殖分化相关基因的作用入手，结合RA的作用机理进一步寻找Mcpr1发挥抑制细胞增殖及促进凋亡作用的相关下游信号分子，探究此基因影响细胞生物学行为的可能机理，以期明确此新基因如何通过抑制腭突间充质细胞的增殖分化而在腭裂形成中发挥作用，为探究腭突发育机理开辟新的领域

结项摘要

本项目利用现代分子生物学手段及动物模型研究，在体内外细胞及组织学水平研究了mcpr1基因异常表达对腭突发育及腭裂形成的影响及相关分子机理，课题进展顺利，基本取得预期研究结果，研究表明mcpr1是RA介导的基因调控网络中的上调靶因子, 阻滞腭突间充质细胞（MEPM细胞）由 G1期到S期过渡,并促进细胞凋亡, 从 Mcpr1 基因与一些细胞周期调控因子及增殖分化相关基因的作用入手,结合 RA 的作用机理进一步探究mcpr1发挥抑制细胞增殖及促进凋亡作用的相关下游信号分子，有助于揭示此新基因如何通过抑制腭突间充质细胞的增殖分化而在腭裂形成中发挥作用的可能分子机理。mcpr1新基因在腭裂发生中的特异调控作用：（1）通过体外培养腭突间充质细胞，观察mcpr1基因在RA处理组和未处理组细胞中的表达变化，发现RA诱导后，mcpr1在转录水平及翻译水平的表达均上调，而mcpr1基因的异常表达对腭突间充质细胞增殖分化有抑制作用。（2）利用转染将干扰载体pGenesil-mcpr1-shRNA导入MEPM细胞，筛选并建立基因稳定表达的腭突间充质细胞模型。（3）成功构建原核表达载体pGEX-6P-2-mcpr1，制备mcpr1单克隆抗体。（4）成功建立小鼠腭裂模型，切片HE染色观察发现实验组双侧腭突体积较对照组小，两侧腭突未接触，而对照组腭突融合，腭骨形成。同一时间点比较，MCPR1蛋白的表达在实验组均强于对照组，证实MCPR1蛋白在腭突内的表达呈时空特异性，提示MCPR1蛋白可能通过调节腭突细胞的分化与增值在腭突的融合过程中发挥着某种调控作用。本项目实施期间培养两名优秀的硕士研究生，将于2013年毕业，发表SCI文章及核心期刊文章，有两篇外文文章整理撰写中，项目实施期间，负责人及项目组成员分别获得职称的晋升及相关国家及省级课题资助。