家蚕黑胸败血菌芽孢杆菌的毒素及其结合蛋白的鉴定、功能和相互作用研究

黑胸败血芽孢杆菌是家蚕细菌性败血病的主要病原之一。本项目通过分离纯化、MAL-TOF/TOF质谱鉴定和基因克隆分析，成功分离并鉴定了该病原的新型毒素蛋白。通过原核表达纯化，获得该毒素蛋白的重组蛋白，添食家蚕幼虫，结果显示其对家蚕幼虫具有显著的致死活性。采用Far western blot、Co-IP、Pull-down和ELISA等实验，结果显示，中肠特异表达的3个胺肽酶（APN4-6）和钙粘蛋白BtR-175等受体均能与毒素蛋白相互结合。通过细胞转染实验，家蚕APN4，APN5和APN6均能与毒素蛋白孵育时均导致细胞形态改变和死亡。上述结果表明，家蚕黑胸败血芽孢杆菌的感染机制可能是毒素蛋白与中肠上的受体（APN和BtR-175）相结合，破坏中肠结构，促使病原菌进入血淋巴，引起宿主昆虫的继发性感染。此外，项目组也对该毒素蛋白在家蚕抗病素材培育和鳞翅目害虫防控等领域的应用开展了探索性研究。