鸡蛋中卵运铁蛋白过敏原的IgG和IgE结合表位的精细定位

本项目拟以鸡蛋中主要过敏原卵运铁蛋白为研究对象，分离纯化卵运铁蛋白，制备出SDS-PAGE纯的抗卵运铁蛋白兔血清，然后采用噬菌体肽库技术，以纯化的兔血清为靶分子对噬菌体七肽库或十二肽库进行筛选，在筛选结果的基础上，拟通过肽扫描技术对鸡蛋中卵运铁蛋白的兔血清IgG结合表位进行精确的表位定位。另外，用鸡蛋过敏患者的血清或构建的血清池开展卵运铁蛋白的人血清IgG和IgE结合表位的筛选与表位精细定位工作。.通过对鸡蛋中卵运铁蛋白过敏原表位定位的研究，可以探明卵运铁蛋白导致鸡蛋过敏反应的物质基础（过敏原表位的氨基酸组成与序列），将对深入开展鸡蛋过敏研究具有重要意义，并可为进一步开展低过敏性或无过敏性的蛋制品加工以及过敏原的检测等研究工作提供理论依据。

鸡蛋过敏是婴幼儿和儿童多发的食物过敏反应，至少约0.5%–2.5%的婴幼儿和儿童对鸡蛋过敏。卵运铁蛋白在蛋清蛋白中含量占第二，是公认的六大鸡蛋过敏原之一，其导致过敏的机理目前尚不清楚，主要原因之一是缺乏对其表位的认识。因此，本项目针对鸡蛋卵运铁蛋白的IgG和IgE结合表位开展了精细定位工作。首先建立了一步离子层析法制备高纯度卵运铁蛋白的方法，纯度高达97%，并获得了一个基于电泳分析方法用于鉴别有铁卵运铁蛋白的发明专利。用制备的卵运铁蛋白免疫实验兔，制备了高效特异的抗卵运铁蛋白的兔多克隆抗体，并建立了亲和纯化抗卵运铁蛋白特异性IgG的方法，纯化后的IgG效价为1:20万。然后采用噬菌体肽库技术，以纯化的兔血清为靶分子对噬菌体七肽库进行筛选，筛选到了17个卵运铁蛋白主要线性模拟表位区。在筛选结果的基础上，利用商业化的固相合成肽试剂盒合成鸡蛋卵运铁蛋白的多肽阵列，通过肽扫描技术对鸡蛋中卵运铁蛋白的兔血清IgG结合表位和人血清IgG/IgE结合表位进行精确的表位定位，共定位出23个卵运铁蛋白兔血清IgG结合表位和13个卵运铁蛋白人血清IgG结合的表位，卵运铁蛋白人IgG和兔IgG共有的结合表位有7个。. 通过本项目的研究，初步探明了卵运铁蛋白导致鸡蛋过敏反应的物质基础（过敏原线性表位的氨基酸组成与序列），对深入开展鸡蛋过敏研究具有重要意义，并可为进一步开展低过敏性或无过敏性的蛋制品加工以及过敏原的检测等研究工作提供表位结构信息。

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