血小板源性MMP-12、 MMP-7和CEACAM1在血小板聚集中的作用及机理研究

血小板膜蛋白受体在血小板激活过程中发挥至关重要的作用，人体CEACAM1，与血小板膜受体GPVI、 PECAM-1相同，同属Ig超家族成员，负调节血小板与胶原的相互作用及血栓的形成，但相关机制仍不清。目前发现在血小板中表达的MMPs有MMP-1、2、3、9 、14，它们通过剪切血小板膜蛋白受体的胞外片段，在血小板的黏附及聚集中发挥重要作用。我们在基因、蛋白及细胞水平证实了人体血小板具有合成分泌.MMP12及MMP-7的功能，通过流式细胞仪发现MMP12可介导人体血小板膜 CEACAM1脱落，采用高效液相色谱、质谱及N端测序分析，我们已精确定位CEACAM1序列中MMP12的酶切位点，并获得分子量与序列及理论与实测分子量均相符合的短肽9条，采用全血电阻法检测发现， MMP12、短肽6783及8496可促进胶原刺激的血小板聚集；采用CEACAM1氨基酸序列中含MMP12酶切位点的荧光短肽，发明了一种检测人体组织MMP12活性的荧光多肽底物及检测方法，该方法操作简便，快速，有一定的特异性；通过选择蛋白质晶体复合物的测试集建立了针对MMP12蛋白的虚拟筛选方法，发现短肽Gly6Thr对MMP12具有抑制作用，呈剂量依赖型。采用血清通过ELISA检测发现冠心病患者CEACAM1及MMP12血清水平明显升高。通过对MMP12-CEACAM1途径的发生方式、机制及生物学功能的深入研究，可为血栓性疾病的诊治提供新的理论基础及研究方向。