细胞型朊蛋白介导Aβ寡聚体神经毒性的信号转导机制研究

试验构建了人朊蛋白基因（prion protein gene，PRNP）真核表达重组质粒,完成了PrPC（cellular prion protein, PrPC）基因过表达和PrPC基因沉默的SH-SY5Y细胞模型及动物模型。细胞模型实验结果显示，PrPC介导Aβ寡聚体的神经毒性, SH-SY5Y细胞存活率明显降低，细胞凋亡率明显上升。动物模型实验结果显示，干预前各组小鼠的Morris 水迷宫实验成绩无显著性差异，拮抗PrPC表达小鼠组（干预组）与PrPC基因过表达小鼠组（模型组）比较，干预组小鼠逃避潜伏期明显缩短，在平台象限停留的时间和在平台象限游程占总游程的百分比明显增加；干预组和模型组小鼠大脑皮质及海马等区域均出现SP阳性斑块。模型组小鼠脑内senile plaques (SP)阳性斑块数量多，体积大；干预组斑块数量则明显减少，体积明显缩小。ELISA 结果显示，干预组Aβ40的生成较模型组Aβ40显著减少，且Aβ42 减少更加明显， 差异具统计学意义。Western blot检测发现模型组MEK及ERK 蛋白的表达显著高于干预组，但未见Ras及Raf蛋白的明显改变。上述结果显示，Aβ寡聚体对神经突触具有明显的毒性作用，并且与神经细胞膜上PrPC 表达有着密切的关系。尽管MEK及ERK 蛋白的表达出现异常，但ERK信号转导通路上游蛋白未出现异常改变，推测PrPC与Aβ寡聚体所介导的神经毒性的作用机制可能与其他相关信号通路相关。