重组CD59蛋白治疗创伤性脊髓损伤及其免疫学机制的研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81171797
项目类别：
面上项目
资助金额：
58.0万
负责人：
尤涛
依托单位：
武汉大学
学科分类：
H1701.创伤
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
秦蓉；陶凤华；范里；朱雷；潘峰；卫爱林；余玲；王福安；徐勇；
关键词：
创伤性脊髓损伤（traumatic complex）膜攻击复合物（membrane CD59蛋白 injury）attack cord spinal

项目摘要

创伤性脊髓损伤截瘫发生率高，迄今仍无有效的治疗方法。研究表明继发的补体激活扮演了十分重要的角色,抑制补体激活可减轻脊髓的损害。但近年的研究证实，补体激活亦有助于脊髓损伤的再生修复。故通过抑制补体激活进行治疗的方法，值得商榷。MAC是补体的终末效应物，在脊髓炎性病变中可在细胞膜上形成孔隙；亦可激活血小板，及产生损伤物质NO，加重损害；而未完全形成的Sublytic（亚溶性）MAC又可促进脊髓细胞的再生修复。创伤性脊髓损伤产生大量的MAC，可能执行同样的功能。故如能抑制MAC的形成，促进Sublytic MAC的生产可能有效的治疗脊髓损伤。CD59蛋白是MAC形成抑制物。我们尝试用基因工程技术重组鼠的CD59蛋白，检测它的生物学活性，用体外的补体激活实验和小鼠脊髓损伤的体内模型来检测其在减少脊髓细胞损伤，促进脊髓修复的效应。并尝试阐明以上的作用机制，为创伤性脊髓损伤建立新的免疫治疗方法。

结项摘要

创伤性脊髓损伤截瘫发生率高，迄今仍无有效的治疗方法。研究表明继发的补体激活扮演了十分重要的角色,抑制补体激活可减轻脊髓的损害。但近年的研究证实，补体激活亦有助于脊髓损伤的再生修复。故通过抑制补体激活进行治疗的方法，值得商榷。MAC是补体的终末效应物，在脊髓炎性病变中可在细胞膜上形成孔隙来加重损害；而未完全形成的Sublytic（亚溶性）MAC又可促进脊髓细胞的再生修复。故如能抑制MAC的形成，促进Sublytic MAC的产生可能有效的治疗脊髓损伤。CD59蛋白是MAC形成的有效抑制物，可否利用基因工程技术重组CD59蛋白来抑制MAC形成，促进Sublytic（亚溶性）MAC生成，从而有利于脊髓功能的恢复。故我们开展此课题的研究。.首先，课题组根据实际经济状况和实验要求，自行设计了动物的脊髓损伤仪器，并改进了小鼠脊髓损伤模型的制备方法。应用保留椎板的经棘突间入路的微侵袭的方法，成功制备了小鼠脊髓损伤模型；且其较常规的动物模型制备时间更短，副损伤更小，操作更方便，经济性及实用性都更强。.其次，课题组利用基因工程技术分别在原核细胞及真核细胞体系重组了小鼠的CD59功能蛋白及人的CD59蛋白，并检测它们的生物学活性。然后在体外原代培养了鼠的神经元和神经胶质细胞，并证实了血浆补体形成的MAC对他们的CDCC损伤效应，而重组蛋白CD59对其有效的保护。.最后，在脊髓损伤小鼠体内，我们检测到了大量的MAC在损伤部形成，应用重组CD59蛋白可有效的促进脊髓损伤小鼠的功能恢复，保护了脊髓组织。体内进一步证实了MAC对脊髓损伤的影响，而抑制MAC有助于脊髓损伤功能的恢复。.我们在本课题的研究中发现，重组CD59蛋白在体外实验中表现出较高的效价。但体内实验结果效果不是特别明显，查阅资料后考虑可能与CD59的天然GPI结构与血浆蛋白结合，影响其结合细胞膜有关，故我们已经开始尝试应用细胞膜亲和性纳米微粒结合CD59蛋白，有利于蛋白与细胞膜的结合，提高效价。因这部分实验跨学科，难度大，我们将在后续的课题中进一步开展。