鸡源、鸭源新城疫病毒致病性差异的分子机理研究

新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种严重威胁养禽业的传染病。本研究从鸡源和鸭源NDV感染宿主的角度来探讨其致病机制。首先筛选2株新城疫毒株强毒株，鸡源基因Ⅶ型GM株和鸭源基因Ⅸ型YC株进行致病性研究。结果显示，2株病毒对SPF鸡致死率为100%；对 15日龄非免疫三水白鸭不致病；15日龄番鸭GM株感染组死亡率44%，YC株无死亡。病理切片显示免疫器官有淤血，出血等病变。随后，利用反向遗传学技术成功拯救出rGM毒株。经RT-PCR，IFA及鸡胚传代鉴定，证明该重组病毒抗原性良好，传代稳定，且与亲本毒株生物学特性基本一致。. 同时，本研究利用Illumina高通量测序方法进行感染细胞全基因组基因数字表达（DGE）测序。结果显示，鸡源GM和鸭源YC株与鸡基因组对应的差异基因Tag数均达1.9万个。经差异表达基因进行聚类分析结果发现，GM和YC株调节的相同基因有ACTR3、HSP25、TXNDC10蛋白等相关基因。2株病毒感染细胞后测到的共同的差异基因有757个基因，对应到参考基因库，得到691个基因的注释。Pathway分析，发现基因参与多条与免疫相关，细胞凋亡相关通路和癌症相关的信号通路。 . 采用iTRAQ对鸡源GM和鸭源YC感染CEF细胞进行了蛋白质组学研究。发现鸡源GM感染细胞后差异蛋白显著上调的有16个，显著下调的11个；鸭源YC感染细胞后差异蛋白显著上调的有15个，显著下调的13个。GO分析结果表明这些蛋白的功能主要涉及转录调节、结构、转运、免疫反应和其它功能等，这些蛋白主要位于细胞质、细胞膜和细胞器（线粒体和溶酶体），还有一些属于分泌性蛋白。Pathway显著性富集分析发现TGF信号通路TGFβ的受体TGFβRI上调。COG数据库比对分析显示大部分蛋白是功能蛋白，有292个；蛋白质修饰，转运，蛋白分子伴侣有190个。随后选择了Cathepsin D、IRF7、P65和β-actin等蛋白进行WB验证，结果显示这个蛋白的与iTRAQ蛋白质组学鉴定结果一致。据此，利用激光共聚焦发现感染新城疫病毒后细胞RelA/p65和IRF7蛋白表达量均明显增加，随后用siRNA和WB验证发现NDV感染DF-1细胞后能够激活RelA/p65和IRF7信号通路，但是激活信号通路的能力存在差异，而且这两条信号通路的变化均能够影响病毒的复制。