钙振荡对猪体外成熟卵子凋亡的分子调控分析

猪体内、外成熟卵子用精子注射或电脉冲处理后，用激光共聚焦显微镜观察激活后钙振荡规律，同时观察凋亡规律，分析钙振荡模式与卵子凋亡关系。用Western Blotting和RT-PCR技术分析同一钙振荡模式卵子的Caspase-12，-9，-3, Bim, Bax，Bcl-2基因表达的变化规律，分析猪体外成熟卵子的凋亡通路。检测不同钙振荡模式卵子中Bim基因表达规律，分析游离钙振荡模式对Bim基因的调控。用RNAi技术抑制Bim基因的表达，观察干涉后卵子的凋亡规律，分析Bim蛋白在凋亡中的功能。比较体内和体外成熟猪卵子中Calreticulin，Ins(1,4,5)P3R和SERCA基因表达活性，分析培养体系是否通过影响钙振荡机制决定卵子质量。项目完成后将明晰猪卵子凋亡的分子通路，确定钙振荡机制的完备程度是否决定卵子质量。研究结果将拓展卵子凋亡理论，为建立猪卵子高效培养技术提供新理论依据。