我国禽波氏杆菌血清型和基因型分析

本研究首先进行了禽波氏杆菌单因子血清的制备及血清型初步鉴定。试验利用波氏杆菌的14个菌株分别制备相应的全菌免疫原，然后免疫1Kg左右的健康家兔，最后采血制备抗血清。分别对14个抗血清进行效价测定均集中在1：4800～1：3200。用已制备好的相应抗原与抗血清进行交叉吸收试验，得到I型和II型两种单因子血清，两种单因子血清的效价分别为1：800和1：1024。不同血清型的单因子血清不与其他血清型菌株发生凝集。利用试验获得的两种单因子血清对实验室已获得的禽波氏杆菌分离株进行血清型的鉴定，证明分离到的P1～P10、P15、LL、XT菌株血清型均为血清I型，P11～P14的血清型则属于II型。. 对禽波氏杆菌RAPD基因分型进行了研究。用细菌基因组抽提试剂盒对22株禽波氏杆菌的DNA进行提取，获得了高纯度和高浓度的细菌基因组DNA，并建立了稳定性和重复性好的RAPD扩增程序。经过对一系列随机引物的筛选，有6条引物能够产生清晰且多态性好的条带。运用筛选的6条随机引物对22株B.avium进行扩增，获得了RAPD指纹图谱。运用分析软件对指纹图谱进行统计分析，计算出各菌株间的遗传距离并进行聚类分析，绘制亲缘关系树状图，最终以遗传距离0.402为界将22株B.avium分成了3个聚类群，其中第一聚类群又可以分为3个亚群，第三聚类群可以分为两个亚群。其中第一聚类群包括了2000年之前的10个分离株（Ba1-Ba10）和2001年之后分离到的Ba12、Ba13、Ba14、Ba20，第二聚类群和第三聚类群中均为2001年之后的分离株，其中Ba15、Ba17、Ba18、Ba22属于第二聚类群，Ba11、Ba16、Ba19和Ba21属于第三聚类群。. 本研究为进一步对其进行系统的血清分型，研究各血清型之间致病性的差异，了解国内外禽波氏杆菌的主要流行菌株的生物学特性，以及更好地了解禽波氏杆菌病的致病机理和免疫机理奠定了基础。