转染siRNA-VEGF-C的淋巴管内皮祖细胞靶向抑制肺癌淋巴管生成的实验研究

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81101723
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    22.0万
  • 负责人：
    吴海卫
  • 依托单位：
    南京大学
  • 学科分类：
    H1819.肿瘤生物治疗
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

抗淋巴管生成是肿瘤生物学治疗新的策略。血管内皮生长因子（VEGF）-C是特异性淋巴管内皮细胞生长因子，能促进肺癌淋巴管生成和淋巴道转移。本课题以体外培养扩增的淋巴管内皮祖细胞（LEPCs）为细胞载体，构建针对VEGF-C的RNA小分子干扰(siRNA)序列，通过腺病毒转染siRNA-VEGF-C进入LEPCs，再静脉注射入肺癌动物模型内，利用内皮祖细胞的天然肿瘤组织趋化性，观察转染siRNA-VEGF-C的外源性自体LEPCs对肺癌组织淋巴管生成的靶向抑制效应，以及其对肿瘤生长、淋巴结转移的影响，并从其对淋巴细胞趋化因子及其受体表达的影响角度探讨其抑制淋巴管生成的可能机制，为肺癌的抗淋巴管生成治疗提供实验依据。

结项摘要

本研究通过检测NSCLC肺癌组织中VEGF-C和VEGFR-3表达，分析这两种蛋白与肿瘤LMVD、淋巴结转移情况、临床复发和术后生存期的关系，结果发现，非小细胞肺癌组织中VEGF-C的高表达与癌旁组织淋巴管的高表达有密切关系，VEGFR-3的阳性脉管数与肺癌淋巴结转移相关联，可作为肺癌诱导生成淋巴管研究的量化指标。在体外细胞实验中，我们确立了一套自通过分离小鼠骨髓单核细胞进行EPC诱导培养的培养方法，并通过细胞形态学观察、细胞表面抗原测定及细胞功能检测三方面确定我们所培养的细胞为EPC，为本项研究中后续部分中细胞移植实验奠定了基础。在本实验中我们首先合成了3对针对VEGF-C mRNA序列的siRNA, 并进行同源性检测，避免对其它基因的干扰。在确认最佳转染条件后，我们将siRNA以lipo 2000转染EPC，使用MTT法检测体外培养的EPC的增殖能力，结果提示，三对合成的干扰序列中siRNA-1#的抑制EPC增殖的能力最强。随后，我们利用Fibrinogen胶3D模型体外模拟脉管发生系统，将siRNA转染EPC，结果发现，与对照组相比，转染siRNA-VEGF-C后，体外模拟的淋巴管生长受到明显抑制，单位体积内脉管数量显著少于对照组，提示在体外实验中抑制VEGF-C表达能抑制淋巴管生成。研究采用绿色荧光小鼠获得EPC，尾静脉注射荷瘤小鼠，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，发现外源性EPC可特异性归巢于肿瘤组织，主要表达于脉管系统内。在皮下注射肺癌细胞株构建的小鼠肺癌模型性，我们通过尾静脉注射转染体外细胞学实验筛选获得的siRNA-VEGF-C序列的EPC，观察肿瘤大小，采用免疫组化法检测肿瘤组织中淋巴管密度，结果发现，与对照组相比，注射siRNA组瘤体体积明显缩小，淋巴管密度明显降低。以上研究提示，提示外周给予的转染siRNA-VEGF-C的EPC能靶向抑制荷瘤小鼠肿瘤组织的生长，其抑瘤作用于抑制淋巴管生成密切相关。

项目成果

期刊论文数量（19）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
血管内皮祖细胞介导的急性肺损伤的保护机制的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中华临床医师杂志(电子版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    姚圣;胡若愚;董国华;许飚;景华
  • 通讯作者：
    景华
达芬奇-S外科手术辅助系统在普胸外科的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    医学研究生学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    易俊;董国华;许飚;李好;景华
  • 通讯作者：
    景华
基质金属蛋白酶-1、-8、-13在急性胸主动脉夹层中的表达及意义
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2010
  • 期刊：
    医学研究生学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    许飚;李云;吴海卫;王常田;邵爱中;景华
  • 通讯作者：
    景华
小鼠同种异体内皮祖细胞移植急性肺损伤的相关研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    东南大学学报(医学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    胡若愚;承燕;李好;张雷;景华;吴海卫
  • 通讯作者：
    吴海卫
主动脉弓部手术中脑保护技术的应用分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2010
  • 期刊：
    医学研究生学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李忠东;胡小南;董国华;张晓华;程晓峰;张利东;周志强;贲艳红;景华
  • 通讯作者：
    景华

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其他文献

Effects of Lipopolysaccharide on function of endothelial progenitor cells from bone marrow in mice
脂多糖对小鼠骨髓内皮祖细胞功能的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Journal of Cardiothoracic Surgery
  • 影响因子：
    1.6
  • 作者：
    李好;强勇;王连;刘灿辉;杨楠;易俊;景华;吴海卫
  • 通讯作者：
    吴海卫
Repair of lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice by endothelial progenitor cells, alone and in combination with simvatatin
内皮祖细胞单独或联合辛伐他汀修复脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    Chest
  • 影响因子：
    9.6
  • 作者：
    李好;强勇;王连;易俊;景华;吴海卫
  • 通讯作者：
    吴海卫

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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