卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV ）编码至少8个开放阅读框（ORFs ），在裂解期DNA复制中扮演重要的角色。其中， KSHV的ORF6编码的单链DNA结合蛋白已被证明参与原点依赖性DNA复制。为了进一步研究ORF6在病毒生命周期中的功能，我们通过使用细菌人工染色体（ BAC）的系统构成的重组体病毒基因组野生型及ORF6基因缺失的突变型。我们筛选出了携带BAC36 （野生型）和BACΔ6（缺失型）基因组稳定的293T细胞系。BAC36细胞用TPA和丁酸钠诱导进入裂解期DNA复制并产生感染性病毒，而BACΔ6细胞则不能发生裂解期DNA复制，也不能产生感染性病毒。然而，这两种缺陷均能由ORF6的反式表达拯救。我们的研究结果提供的遗传学证据表明， ORF6是KSHV裂解性复制所必需的。携带BAC36 （野生型）和BACΔ6基因组的稳定293T细胞可以被用作工具，调查ORF6在KSHV的裂解性复制的详细功能。此外，本研究还通过构建截短体和点突变，确定了ORF6的核定位信号NLS3（KKRK）介导了ORF6的入核，KKRK属于经典的核定位序列。但是进一步研究发现ORF6蛋白N端部分序列缺失后，NLS3不能够引导蛋白入核，分别缺失N端29，59，199，399，599氨基酸序列后，截短体蛋白呈细胞质分布。当缺失699氨基酸序列后，蛋白可以入核。说明远离核定位信号的序列能够影响NLS3的入核功能。