异常糖基化CD44和其单抗KMP1与膀胱癌发病机理的关系研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81360376
项目类别：
地区科学基金项目
资助金额：
50.0万
负责人：
丁明霞
依托单位：
昆明医科大学
学科分类：
H1818.肿瘤免疫治疗
结题年份：
2017
批准年份：
2013
项目状态：
已结题
起止时间：
2014-01-01 至2017-12-31

项目参与者：
王海峰；詹辉；刘靖宇；左毅刚；王伟；韦海荣；李子祺；赵金全；
关键词：
CD44 膀胱癌单克隆抗体

项目摘要

In the previous study, KMP1, a bladder cancer-specific monoclonal antibody, was prepared, and it could inhibit the growth of bladder cancer cells in vitro experiments. Its ligand binding was the bladder cancer cell membrane aberrant glycosylation of CD44. Then,the aberrant glycosylated CD44 may contribute to recur and planting migration of bladder cancer. KMP1 can recognize CD44 of EJ cells specially and inhibits its proliferation and migration in vitro. CD44 silencing can effectively decrease EJ cells immuno- bounding to the monoclonal antibody KMP1 and inhibit the migration and the proliferation of EJ cells in vitro.It was confirmed that N-acetylamino galactosyltransferase 1 (GALNT1) participated the aberrant glycosylation of CD44. GALNT1 knockdown had no remarkable changes in cell migration, Silenced GALNT1 expression significantly inhibits proliferation and tumor growth of bladder cancer in vitro.In order to study the relationship between aberrant glycosylation of CD44 and mAb KMP1 in the development of bladder cancer, optical in vivo imaging will be used to study the the antitumor function of KMP1 to demonstrate whether other glycosyltransferase enzymes involve in the aberrant glycosylation of the CD44 protein, and to explore more targeted therapy sites for human bladder cancer. Moreover, KMP1 will be evaluated whether it can be as a specific tumor, and to screen tumor stem cells that labeled G1 grade bladder cancer. This study can lay the foundation for KMP1 as a bladder cancer marker with independent intellectual property rights and a targeted cancer therapy drug.

在前期研究中，我们制备了一种能与膀胱癌特异性结合的单克隆抗体KMP1，体外实验证实它能抑制膀胱癌细胞的生长，已证明它结合的配体是膀胱癌细胞膜上异常糖基化的CD44，并已证明N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)参与CD44的异常糖基化。为了进一步了解异常糖基化的CD44和单抗KMP1与膀胱癌发生发展的关系，本研究拟采用活体成像研究KMP1抑制膀胱癌细胞EJ在裸鼠体内成瘤功能；找寻是否有GALNT1以外的其他糖基转移酶参与膀胱癌CD44蛋白的异常糖基化，探寻更多的膀胱癌靶向治疗的位点；探索KMP1能否作为一种特异性瘤标来进行G1级膀胱尿路上皮癌肿瘤干细胞的筛选。为将其开发为一种具有自主知识产权的膀胱癌标记物、肿瘤靶向治疗药物打下基础。

结项摘要

我们筛选到一个抗人膀胱癌特异性单克隆抗体KMP1。在本基金的资助下，对KMP1单抗及其所识别的抗原作了深入的研究，结果如下：1. KMP1单抗能够特异性的识别膀胱癌细胞和组织。我们筛选到一株能与膀胱癌细胞高度特异结合的单克隆抗体-KMP1。KMP1单抗与人膀胱癌细胞系及人膀胱癌组织呈强阳性反应；而与正常人膀胱组织呈阴性反应。2. KMP1表位与膀胱癌的病理分期分级成正相关。免疫组化证实，随着膀胱癌的病理分期分级的增加，KMP1抗原的表达量也相应的增高。KMP1抗原的表达量越高，病人的预后则越差，具有显著性差异。3. KMP1具有显著的抑瘤作用。我们用KMP1 单抗处理体外培养的膀胱癌细胞系，采用集落形成实验、划痕实验和粘附实验，发现KMP1单抗能有效地抑制膀胱癌细胞的克隆形成、迁移和粘附。4. KMP1在体内抑制膀胱癌皮下移植瘤的生长。我们将绿色荧光蛋白的EJ细胞，皮下注射到裸鼠背部建立裸鼠移植瘤模型，并进行腹腔注射KMP1抗体药物。在动物模型体内，KMP1 抗体有很强的抑制肿瘤生长的能力。5. KMP1抗体识别的表位是膀胱癌组织上异常糖基化修饰的CD44。我们通过免疫沉淀、凝胶过滤结合质谱分析，鉴定出KMP1抗体识别的膀胱癌细胞靶点为异常糖基化修饰的CD44，基因沉默CD44能降低膀胱癌EJ细胞的迁移、增殖和体内成瘤能力，该靶点可作为作为一种新的人膀胱癌肿瘤标记物。这部分工作已整理成文，并在Cancer Research 中审稿。6. 发现了膀胱癌干细胞全新的标志物糖基化转移酶GALNT1，阐明了该标志物介导Hedgehog信号通路调控膀胱癌干细胞干性维持的分子机制。这部分工作与2016年发表在Cancer Research上。7. 尿液microRNAs用于膀胱癌筛查的meta分析。我们通过PubMed，Embase，Web of Science，Cochrane等数据库进行精确搜索并进行meta分析，结果表明：尿液microRNAs在膀胱癌无创诊断中具有很高的应用价值。这部分的结果，发表在International Journal of Clinical and Experimental Medicine杂志上。