克隆水牛BMP15基因CDS和全基因组序列，长度分别为1185 bp和6490 bp，与奶牛序列相似性98%和97%。水牛GDF9全长CDS为1362bp，与奶牛序列相似性98%，预测水牛BMP15和GDF9蛋白分别在290-368AA和389-449AA位点间存在保守TGFβ功能域。胎儿期到优势化卵泡发生阶段等各时期BMP15、Kit和C-kit均表达，但胎儿期卵巢BMP15最低。克隆BMP15启动子序列构建BMP15启动子荧光报告载体，分别转水牛BFF、颗粒细胞和注射卵母细胞，发现BMP15在卵母细胞高效启动标记荧光蛋白EGFP表达；为解析BMP15、GDF9受体，通过BiFC技术，经细胞转染，发现BMP15受体有Alk3、Alk5、Alk6，且与Alk6亲合力高，BMP15既能形成同源二聚体又能与GDF9形成异源二聚体；GDF9受体有Alk6；定性分析BMP15与Alk6及FecB突变类型Alk6亲和力发现，BMP15与FecB突变类型Alk6亲和力较野生型下降。成功创建水牛源FecB突变转基因小鼠，并扩繁获得后代；构建TALEN载体及报告载体RGS、pSSA-LUC，细胞水平表明水牛BMP15的 TALEN位点1效率40%，FOXO3的TALEN位点1效率31.3%。mRNA胞质注射水牛、小鼠胚胎，BMP15 TALEN位点1无突变，FOXO3 TALEN1在48胚胎中4个突变。FOXO3敲除小鼠模型中20只小鼠7只突变；分别构建gRNA序列和相应gRNA活性检测报告载体，联合Cas9共转293T，检测gRNA介导Cas9靶向切割BMP15和GDF9候选位点活性发现，b-BMP15-gRNA2/4/5和b-GDF9-gRNA4/5具较高效率；以水牛BFF细胞为供体筛选水牛BMP15和GDF9靶向突变细胞系。对单基因敲除发现，b-BMP15-gRNA4/5靶向敲除效率分别44.4%和55.6%，b-GDF9-gRNA4/5靶向敲除效率分别30.8%和40%。当对水牛BMP15和GDF9双基因敲除时，载体b-BMP15-gRNA4/b-GDF9-gRNA5的BMP15敲除效率37.5%，GDF9为10%； b-BMP15-gRNA5/ b-GDF9-gRNA4载体的BMP15敲除效率为30%，GDF9为40%，证明在水牛BFF细胞上可同时对两个目标基因进行编辑。