番木瓜原生质体中siRNA及病毒抑制因子在RNA沉默路径中的功能研究

番木瓜环斑病毒是制约番木瓜生产的一大障碍，人们期待着利用生物技术给PRSV抗病毒机理研究带来一次革命性突破。RNA干扰是生物体在进化中形成的一种内在基因表达的调控机制，在生物抵御外来病毒的入侵方面有着重要的作用，为植物抗病毒研究开辟了新的思路。本课题希望在番木瓜原生质体中发展一种RNA沉默系统，剖析原生质体中，在多种沉默诱导子，如：siRNA，dsRNA，DsRed和质粒pGA482G/35SGFP的作用下，报告基因GFP的反应；合成针对番木瓜PRSV特异性的siRNA，筛选若干有效的siRNA；在细胞水平上调查病毒抑制因子的作用，将PRSV病毒抑制物HC-pro, P1，CP基因与报告基因构建到双元表达载体中，与原生质体细胞共转染，通过荧光分析、RNA检测和分子杂交试验，分析病毒抑制因子在番木瓜原生质体中抑制RNA沉默的方式和效果，为开辟新的抗病毒育种途径和制定抗病毒方案奠定理论基础。