小胶质细胞转核P2X7受体介导的生物学效应的研究

批准号:
30970918
项目类别:
面上项目
资助金额:
33.0 万元
负责人:
向正华
依托单位:
学科分类:
C0901.分子与细胞神经生物学
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
高霄飞、蒋平、徐晓辉、郭卫、余强、沙成
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中文摘要
活化态小胶质细胞(MG)在脑外伤、缺血、炎症、退行性病发病过程中起重要作用,病变局部及邻近区受损细胞释放出大量ATP,后者通过P2X受体激活局部MG。过度激活的MG会对局部细胞造成二次损伤。因此查明ATP激活MG的机制将为辅助治疗上述疾病提供依据。研究表明ATP可通过P2X7受体激活MG。我们的实验表明正常MG表达的P2X7受体位于胞浆和胞膜上,高浓度ATP刺激后P2X7受体短时间内会转移到核膜和核质网上,提示转核的P2X7受体可能参与MG的激活过程。钙离子相关通道转核参与调节细胞功能活动还未见报道。本课题将进一步用钙离子成像等技术证明ATP通过转核P2X7受体调节核钙信号;用免疫组织化学、蛋白印记和RT-PCR技术寻找已知的与P2X7受体相关的信号分子;用液相二维胶分离和质谱鉴定技术寻找新的可能与P2X7受体相关的信号分子,查明转核后P2X7受体影响MG功能活动的信号转导途径。
英文摘要
正常条件下P2X7受体位于小胶质细胞的胞膜和胞质。在高浓度ATP刺激后部分细胞P2X7受体在短时间内出现明显转核现象,随着刺激时间的延长,P2X7受体转核的细胞逐渐增多;激光共聚焦显微镜断层扫描技术提示转核的P2X7受体位于核膜和核质网上,这种现象可被P2受体拮抗剂(PPADS)所阻断;用P2X7 受体不同区段的抗体证实P2X7 受体是整体转移到核内,因而可以保持离其子通道特性;在P2X7基因的C端连接上EGFP转染的HEK293细胞,这些转染的P2X7-EGFP基因的HEK293细胞在ATP刺激后也观察到了EGFP转核现象。. 首先用了较长的时间分离纯化有活性的小胶质细胞核。再用钙离子成像技术检测检测转核P2X7 受体是否调节核钙信号,应用了P2X7 受体激动剂ATP, BzATP等没有发现明显的核钙信号变化,经过长时间的无数次试验均没有发现P2X7 受体激动剂能引起核钙信号的变化。因此目前认为转核的P2X7受体可能没调节核钙离子信号的功能。用酵母双杂交方法发现:P2X7受体 C端与一转核穿梭因子和蛋白水解酶,以及几个转录因子有强的相互作用,提示P2X7受体C端可能剪切后,在转核穿梭因子的帮助下入核,调节基因转录,从而激活小胶质细胞。. 此外我们发现ATP通过P2X7受体参与了缺血再灌注后海马CA1区锥体神经元的迟发性死亡:缺血再灌注后海马CA1区小胶质细胞P2X7受体表达水平升高,P2X7受体升高发生在锥体神经元迟发性死亡之前。静脉注射BBG或腹腔注射A74003(P2X7受体拮抗剂)后,可部分抑制MG激活和部分挽救海马CA1锥体神经元。ATP经P2X7 受体激活小胶质细胞可能与ERK通路相关。小胶质细胞微泡产生可能与DND相关,P38 通路参与了小胶质细胞微泡脱落。BBG和A74003能明显改善缺血再灌注大鼠行为学的影响。上述实验结果表明ATP通过P2X7参与了缺血再灌注后海马CA1锥体神经元的凋亡,P2X7受体将成为治疗靶点,其拮抗剂将有助于缺血再灌注后的神经保护,为临床治疗提供直接依据。
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P2X5 receptors in the mouse prenatal central and peripheral nervous systems.
小鼠产前中枢和周围神经系统中的 P2X5 受体。
DOI:--
发表时间:--
期刊:Purinergic Signalling
影响因子:3.5
作者:向正华
通讯作者:向正华
Oxytocin is expressed by both intrinsic sensory and secretomotor neurons in the enteric nervous system of guinea pig
催产素由豚鼠肠神经系统中的内在感觉神经元和分泌运动神经元表达
DOI:10.1007/s00441-011-1155-0
发表时间:2011-03
期刊:Cell and Tissue Research
影响因子:3.6
作者:Yu, Qiang;He, Cheng;Xiang, Zhenghua;Ji, Ruihua;Gao, Xiaofei;Fu, Jiqiang;Guo, Wei;Song, Xianmin;Zhao, Xiaolin;Burnstock, Geoffrey;Shi, Xueyin
通讯作者:Shi, Xueyin
DOI:10.1007/s11302-011-9249-4
发表时间:2011-08
期刊:Purinergic Signalling
影响因子:3.5
作者:Xianmin Song;Xiao-fei Gao;Dazhi Guo;Qiang Yu;W. Guo;Cheng He;G. Burnstock;Z. Xiang
通讯作者:Xianmin Song;Xiao-fei Gao;Dazhi Guo;Qiang Yu;W. Guo;Cheng He;G. Burnstock;Z. Xiang
DOI:10.1007/s11302-011-9246-7
发表时间:2011-12-01
期刊:PURINERGIC SIGNALLING
影响因子:3.5
作者:Song, Xianmin;Guo, Wei;Burnstock, Geoffrey
通讯作者:Burnstock, Geoffrey
DOI:10.1111/j.1469-7580.2011.01364.x
发表时间:2011-06-01
期刊:JOURNAL OF ANATOMY
影响因子:2.4
作者:Chen, Donghui;Wang, Wei;Zheng, Hongliang
通讯作者:Zheng, Hongliang
ATP经P2X4受体介导在全脑缺血再灌注损伤中的作用及机制的研究
- 批准号:81471260
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:70.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:向正华
- 依托单位:
P2X1受体介导的小胶质细胞激活和凋亡机理的研究
- 批准号:30670639
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:30.0万元
- 批准年份:2006
- 负责人:向正华
- 依托单位:
细胞外ATP诱导的小胶质细胞活化及凋亡的研究
- 批准号:30070246
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:15.0万元
- 批准年份:2000
- 负责人:向正华
- 依托单位:
国内基金
海外基金
