Sox2-CDP复合物在食管鳞癌发生和恶性进程中的功能分析

Previously, we have demonstrated that Sox2 could interact with CDP protein through bimolecular fluorescence complementation(BiFc) assays. To analyze the roles of Sox2-CDP complex in tumorigenesis and deleterious progress of esophageal squamous cancer, we expect to utilize technologies involved in the molecular andcellular biology in our studies.In the future,We will perform our studies in the following aspects:Firstly,we will confirm the interacting domains between Sox2 and CDP prtein with BiFc,mutagenesis and co-immunoprecipitation, and then fish a peptide aptamers which could specifically bind to interacting domains from a constrained peptide-expressing library; Secondly, we will use the specific peptide aptamers to disrupt the generation of Sox2-CDP complex and analyze the gene expression patterns with microarray; Thirdly, we want to pick out and analyze the role of some interesting genes in process of cancer based on microarray; Finally, we also want to dissect the exact exogenous stimulus which could induce Sox2-CDP generation and transform normal esophageal epithelium cells,meanwhile we want to set up the disease model of esophageal tumorigenesis.Judging from described above,we believe our study will not only provide evidences to explain the mechanism of esophageal squamous cancer induced by exogenous stimulus, but also provide a basis for the esophageal squamous cancer therapy.

在验证Sox2与CDP之间存在相互作用的基础上，本课题拟采取分子生物学和细胞生物学手段，揭示Sox2-CDP蛋白复合物在食管鳞癌的发生及其恶性进程中的功能。本课题拟从以下几个方面开展：1.利用双分子荧光互补、点突变和免疫共沉淀技术确定Sox2与CDP相互作用的结构域，并从一个构象固定的肽适配子表达文库中筛选能特异靶向结合其相互作用结构域的肽适配子；2.利用表达的特异肽适配子去竞争结合并干扰Sox2-CDP复合物的形成,分析干扰前后基因表达谱变化；3.对筛选的靶基因功能进行分析；4.探讨外源刺激对正常食管上皮细胞中Sox2-CDP形成的影响，建立食管鳞癌形成的疾病模型。本课题不仅从机理上阐明食管鳞癌发生的内外部条件，而且为食管鳞癌的基因治疗奠定了基础。

在验证Sox2与CDP之间存在相互作用的基础上，本课题采取分子生物学和细胞生物学手段，揭示Sox2-CDP蛋白复合物在食管鳞癌的发生及其恶性进程中的功能。本课题从以下几个方面进行了开展：1.获得一个基于双分子荧光互补技术建立的构象固定的肽适配子表达文库；2.利用双分子荧光互补、截短突变和免疫共沉淀技术确定Sox2与CDP相互作用的结构域；3.从肽适配子表达文库中筛选能特异靶向结合其相互作用结构域的肽适配子；4.利用表达的特异肽适配子去竞争结合并干扰Sox2-CDP复合物的形成,分析干扰前后肿瘤的恶性进程及其分子基础。通过本课题的实施，我们确定了Sox2和CDP相互作用的结合结构域分别位于Sox2蛋白的C端278-317氨基酸残基以及CDP蛋白的N端1-100氨基酸残基，并从文库中筛选获得4个候选肽适配子，验证了肽适配子与结合结构域的相互作用；此外，与对照相比，我们发现食管鳞癌细胞中过量表达这些肽适配子在细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭方面具有重要的抑制作用，并且导致了参与这些活动的相关分子的表达水平变化。综合分析，在候选肽适配子中，P8（LNLFTFRLKICV）具有最佳的肿瘤抑制功能，它不仅可以作为Sox2-CDP功能的研究工具，而且有望通过后续的加工修饰制备成食管鳞癌的治疗药物。

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