Tom1L1在胞内体蛋白分选机制中功能的研究
结题报告
批准号:
31171289
项目类别:
面上项目
资助金额:
56.0 万元
负责人:
刘宁生
依托单位:
学科分类:
C0701.细胞器及亚细胞结构、互作与功能
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
罗琳、赵伟红、杨海莲、李垒、张澄
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中文摘要
在泛素介导的受体内吞作用中,胞内体蛋白分选机制决定了泛素化蛋白的去向,其中胞内体蛋白分选转运复合物(ESCRT) 起关键的作用。Tom1L1参与EGF受体的内吞作用,胞内体分选和Src调节的信号传递等通路。我们前期工作已发现Tom1L1是调节EGF受体内吞通路的重要连接分子,但在胞内体蛋白分选中的具体功能和作用机理还有待了解。本课题将进一步应用过度表达Tom1L1突变体和RNA 干扰等技术,研究Tom1L1在A431,Hela和Hrs/STAM敲除MEF细胞,EGF受体和 Ub-TfR的胞内体蛋白分选过程中具体机理以及与ESCRT复合物相互影响, 并应用GST pull-down、CO-IP、质谱分析技术等技术寻找Tom1L1的相互作用因子,分析Tom1L1在胞内体蛋白分选的具体功能和分子机制,更加深入了解EGF等受体的胞内体蛋白分选和细胞的调控机理。
英文摘要
背景:Tom1L1是EGF受体内吞通路的重要连接分子,Tom1L1并与EGF受体一起进入内吞途径并进入胞内体。实验数据表明Tom1L1通过与TSG101的作用被吸引到胞内体, 而且这个过程和Tom1L1的磷酸化无关。..主要研究内容、重要结果、关键数据:Tom1L1可以识别泛素化蛋白, Hrs和STAM。 Tom1L1被过度表达的Hrs吸引到胞内体。在Hrs-KO和STAM-KO细胞,Tom1L1不能定位到胞内体body structure; 而在Hrs-Re细胞,Tom1L1可以定位到胞内体body strcutre。knock down Tom1L1, EGFR所在的胞内体明显变大,数量变少,表达m-Tom1L1后,胞内体体积恢复正常。在A431细胞中分别knock down Hrs, Tom1L1可以延缓EGFR的降解, 而且同时knock down Hrs和Tom1L1时, 效果更加明显。在Ubi-transferrin receptor模型中,过度表达Tom1L1时,它可以和HA-TfR-ubi共定位于胞内体的body structure;在knock down Tom1L1时,TfR-Ubi定位的胞内体body structure数量变少,体积变大, 和在Hrs-KO,STAM-KO细胞中的结果相似, 而且这时Tom1L1不再被吸引到胞内体上。在Hrs-Re细胞中,TfR-ubi定位的胞内体数量增加, 体积变小。HA-Tom1L1-PX融合蛋白可以吸引Clatrhin到胞内体。..科学意义:我们认为Tom1L1通过和Hrs的相互作用,参与胞内体的分选过程, 并帮助吸引clathrin参与胞内体的分选过程。我们推测,在胞内体分选过程中,Hrs/STAM将Tom1L1吸引到胞内体,Tom1L1通过与泛素化蛋白, Hrs, STAM和TSG101的结合, 参与ESCRT复合体的形成,并帮助吸引clatrin到胞内体,开始胞内体的分选过程。
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MicroRNA 206 andMicroRNA574-5p are highly expression in Coronary Artery Disease
MicroRNA 206 和 MicroRNA574-5p 在冠状动脉疾病中高表达
DOI:--
发表时间:--
期刊:Bioscience Reports
影响因子:4
作者:Jehangir T;Bu S;Liu N*;Lian J*
通讯作者:Lian J*
DOI:--
发表时间:2014
期刊:中国细胞生物学学报
影响因子:--
作者:李娜;刘宁生
通讯作者:刘宁生
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