目的：在发现二烯丙基二硫（DADS）抑制人结肠癌SW480细胞的差异蛋白质中，肌动蛋白解聚因子（ADF）明显下调基础上，研究DADS通过Rac1-Rock/Pak1-LIMK1-ADF通路抑制SW480细胞增殖与迁移侵袭。方法：采用构建稳定高表达与低表达细胞系、RT-PCR、Western blot、细胞迁延、细胞侵袭、裸鼠移植等技术。结果：DADS可抑制SW480细胞增殖、G2/M期阻滞、迁移与侵袭，下调Rac1、Rock1、PAK1、LIMK1、Destrin mRNA与蛋白和p-LIMK1、p-cofilin1表达 (P<0.05)。成功构建稳定沉默LIMK1基因的LIMK1-miR/SW480细胞和高表达LIMK1基因的pIRES2-LIMK1/SW480细胞。LIMK1沉默组G2/M期高于对照组和空载体组，DADS作用沉默组后阻滞更显著 (P<0.05)。沉默组和DADS组迁移与侵袭较对照组和空载体组降低，LIMK1与p-LIMK1下调 (P<0.05)。高表达细胞增殖与迁移侵袭能力较照组和空载体组增强，DADS作用后减弱，高表达组在处理前后G2/M期细胞降低，高表达组较空载体组和对照组LIMK1、p-LIMK1与p-cofilin1上调 ，DADS处理后下调 (P<0.05)。DADS与LIMK1沉默可下调uPA/uPAR (P<0.05)。LIMK1、destrin、cofilin1在结肠癌表达明显高于腺瘤与正常组织 (P<0.05)，高分化腺癌分别明显低于中分化与低分化腺癌 (P<0.05)，在体积≥5.0cm、淋巴结转移和C+D的结肠癌分别高于< 5.0cm、无淋巴结转移和A+B组 (P<0.05)。DADS和沉默LIMK1可抑制各种SW480细胞裸鼠移植瘤生长，LIMK1高表达可减弱DADS抑制效果。结论：LIMK1、destrin、cofilin1与结肠癌的发生、分化程度、肿瘤大小、转移和临床分期相关。DADS负调控Rac1-Rock/Pak1-LIMK1-ADF通路抑制SW480细胞增殖与迁移侵袭。DADS可直接或通过LIMK1间接下调uPA/uPAR抑制SW480细胞迁移与侵袭。DADS与沉默LIMK1可抑制裸鼠移植瘤生长。LIMK1在调控通路起着重要作用。