磁共振成像活体研究EphB4和EphrinB2基因对肿瘤血管新生的作用

Eph是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族，Ephrin是其配体，两者均为膜结合蛋白，相互依赖进行信号转导。Eph/ephrin 通路在肿瘤发生及血管形成中发挥重要作用。然而EphB4是一种多功能蛋白，在不同类型肿瘤、或同种肿瘤的不同阶段发挥的作用并不相同，有时甚至完全相反。关于其在结直肠癌中发挥的作用存在较大争议，且在结直肠癌血管生成中发挥的作用尚未阐明。本项目旨在研究EphB4及ephrinB2在结直肠癌中的表达，更好地探讨其在结直肠癌发生发展及血管形成中的作用。我们采用组织芯片及免疫组化法检测EphB4及ephrinB2在200例结肠癌组织及50例癌旁组织中的表达，结果显示EphB4 蛋白在结直肠癌组织中的表达显著高于正常粘膜，而ephrinB2在两组组织中的表达无显著差异。EphB4高表达与结直肠癌的浸润深度，淋巴结转移，远处转移及TNM分期显著相关。我们进一步利用慢病毒介导的RNA 干扰及基因过表达技术构建稳定沉默及稳定过表达EphB4的结肠癌细胞系。细胞学实验表明，EphB4沉默后，SW480细胞增殖能力减弱，细胞周期阻滞于G0/G1期，凋亡细胞百分数增加。同时沉默组细胞体外运动迁移、细胞基质黏附力及侵袭力减弱。而过表达EphB4后，SW480细胞体外增殖、运动迁移、基质黏附及侵袭力增强。Western blot检测表明EphB4沉默后cyclin-D1、VEGF、MMP-2及MMP-9表达减少而CyclinE、ephrinB2、β-catenin、E-cadherin表达增加。裸鼠皮下移植瘤实验进一步表明，沉默EphB4表达后，SW480细胞成瘤能力减弱，移植瘤体积和重量降低，过表达EphB4移植瘤体积和重量明显升高。用免疫组化法检测CD34，标记移植瘤中微血管的内皮细胞，计算微血管密度MVD，结果表明MVD与EphB4表达密切相关，过表达EphB4的移植瘤中MVD明显增高。同时侵袭转移能力更强，荷瘤鼠模型中可观察到肿瘤细胞的横纹肌、结缔组织浸润及血管侵犯。E-cadherin表达降低提示EphB4高表达的肿瘤细胞间粘附力明显降低。本课题系统地研究了EphB4在结直肠癌中所发挥作用，确定其在结直肠癌发生发展中起促进作用，并促进肿瘤血管的生成。抑制EphB4有望成为结直肠癌治疗的靶点。我们的研究为EphB4作用机制的研究提供了更多的实验基础和理论依据。