构建猪SLA-I复合体筛选口蹄疫病毒CTL表位的研究

猪主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex, MHC）亦称为猪白细胞抗原（swine leukocyte antigen, SLA），其I类分子与动物的细胞免疫有关。SLA-I包括重链和轻链β2m。SLA-I重链分子包括3个功能基因，分别是SLA-1，SLA-2和SLA-3。其中，SLA-2功能基因与SLA-1和SLA-3在信号肽部位存在明显的差异。本研究利用分子克隆技术克隆了六品系猪SLA-2等位基因，包括SLA-2-YC，SLA-2-DYK，SLA-2-TPK，SLA-2-HB01，SLA-2-YTH和SLA-2-LWH。其中前三个品系猪为国外品系，后三个为国内地方品系猪。其基因序列号目前已经在DDBJ/EMBL/GenBank上发表，对应的序列号为: AB672507，AB672505，AB607801，AB602431，AB672508，AB672506。另外克隆了荷包猪的SLA-I类轻链β2m基因，序列号为AB436775。以六品系猪SLA-2及轻链为目标基因，通过剪接重叠延伸（splicing overlap extension, SOE）PCR方法扩增各品系猪SLA-2-Linker-β2m，并与p2X载体连接，重组质粒转化大肠杆菌TB1，IPTG诱导，SDS-PAGE及Western-blot检测表达蛋白，结果显示6个品系猪均成功表达了SLA-I复合体蛋白，并以融合蛋白MBP-SLA-I（麦芽糖结合蛋白）的形式存在。6品系猪SLA-I蛋白经过纯化、切割、再分离纯化，与合成的口蹄疫病毒多肽在体外进行自然结合，并通过酸洗脱、C-18柱纯化等分离结合多肽，结果证实Q01及QA4能够与多品系猪SLA-I复合体结合。ELISPOT及CTL实验进一步证实Q01及QA4具有细胞杀伤活性。研究得出结论：本研究成功构建了6品系猪SLA-I复合体，并可以在体外筛选口蹄疫或其他猪源病毒多肽；本研究结合CTL实验及ELISPOT实验成功筛选到2类具有功能的口蹄疫病毒CTL表位。