检测血清糖原磷酸化酶浓度水平的小分子探针的设计与合成

糖原磷酸化酶(GP)是急性冠脉综合征(ACSS)早期诊断的特异性生化标志物，能够快速灵敏的反映缺血性心肌损伤。因此，GP测定在临床急性冠脉综合征早期诊断、指导治疗及预后观察等方面有着广阔的应用前景。本项目综合应用活性导向蛋白质谱技术(ABPP策略)，针对GP，分别以BAY R3401和CP320626为活性化合物，设计合成了5类全新的用于标记GP的小分子探针，同时合成了一类探针分子阴性对照，共获得中间体45个，目标化合物24个，其中新化合物62个。测定了所合成探针分子对糖原磷酸化酶的抑制活性，对大鼠原代肝细胞及HepG2人源肝细胞糖原降解的直接抑制作用、对正常的HepG2细胞及胰岛素抵抗的HepG2细胞(IR-HepG2)葡萄糖消耗的影响。通过体外筛选，优选了体外活性相对较好的探针分子分别进行了HepG2细胞结合蛋白标记检测及血清中GP的标记检测，最终获得了一个可在急性冠脉综合征发生时特异性标记血清GP并实现半定量的分子探针V1，该探针分子对急性心肌缺血模型大鼠血清GP的标记明显高于正常SD大鼠血清。经过对所标记的GP进行半定量计算，可以初步判断动物是否发生了急性心肌缺血损伤。通过本项目的实施，建立了一种可供临床应用的新型血清GP浓度水平的检测方法，得到了一个可用于急性冠脉综合征早期诊断的重要工具探针，并为以后设计标记血清GP浓度水平的小分子探针提供更多的理论依据，为急性冠脉综合症的诊断及机制研究提供重要参考。