游仆虫大核发育过程中IES删除相关蛋白PDD基因克隆与功能分析

纤毛虫小核向大核发育过程中，基因组发生了特异的删除和重排，近来研究表明纤毛虫删除的DNA序列与高等真核生物细胞中异染色质的形成可能有相同的机制。八肋游仆虫大核发育过程中大约90-95%的DNA序列被特异删除。本研究将克隆含有特异结合异染色质domain的PDD蛋白家族基因，分析该家族基因在进化中的地位。通过基因重组技术，在大肠杆菌和酵母中表达PDD蛋白，建立纯化技术路线，制备抗体。通过RT-PCR、Northern 杂交、Western-blotting检测该家族基因在大核发育过程中的动态变化。荧光和激光共聚焦显微镜观察PDD蛋白在细胞中的分布, 分析它们的功能。通过已建立的酵母双杂交文库筛选与PDD蛋白相互作用的蛋白；通过RN Ai技术分析PDD基因沉默后，特异DNA序列删除的变化。由此比较游仆虫中异染色质蛋白和高等真核生物中该类蛋白的作用异同，为阐明游仆虫DNA序列的删除机制奠定基础。