MVA和MEP途径遗传改造对青蒿素生物合成的影响
结题报告
批准号:
31070266
项目类别:
面上项目
资助金额:
32.0 万元
负责人:
廖志华
依托单位:
学科分类:
C0204.水分和营养物质的运输与代谢
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
杨春贤、阳义健、刘小强、曾令江、郑月、王贵君、卢衍、强玮、许宏宣
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中文摘要
青蒿素是目前治疗疟疾最有效的天然药物之一,但在天然青蒿中含量较低。代谢工程是提高青蒿素含量的最有效手段之一,而开展青蒿素生物合成的代谢研究是实现其代谢工程的必要前提。青蒿素前体不仅由经典的MVA途径提供,而且也由新近发现的MEP途径提供。.本研究将以青蒿MVA途径中的限速酶基因HMGR和MEP途径中的限速酶基因DXR为靶基因,采用不同代谢工程策略,即打破限速步骤(过量表达HMGR/DXR)和阻断代谢途径(反义RNA降低HMGR/DXR表达),以及这两种代谢工程策略联合应用(过量表达HMGR+反义RNA降低DXR表达;过量表达DXR+反义RNA降低HMGR表达),采用转基因技术实现对青蒿MVA和MEP途径共8种方式的遗传改造,同时考察转基因青蒿的青蒿素合成能力,从而明确MVA和MEP途径在青蒿素合成的作用,为基于MVA和MEP途径实现青蒿素代谢工程提供理论依据。
英文摘要
青蒿素(Artemisinin)是治疗疟疾最有效的天然药物,但在天然青蒿(Artemisia annua L.)中含量较低。代谢工程是提高青蒿素含量的最有效手段之一,而开展青蒿素生物合成研究是实现其代谢工程的必要前提。本研究将采用分子生物学和生物技术手段研究MEP和MVA途径在青蒿素生物合成的作用。.MeJA处理青蒿发现,MVA途径限速酶基因HMGR收到MeJA正调控,MEP途径上多个重要结构基因包括DXS、DXR和HDR都受到MeJA正调控,这有利于MVA和MEP途径合成更多的前体供给下游代谢产物的生物合成;同时发现,MeJA极显著上调FPS表达,这有利于MVA和MEP途径提供的5C前体向15C的倍半萜前体转化;青蒿素合成特有途径上中结构基因ADS、CYP71AV1、ALDH1和DBR2等都受到MeJA上调,从而导致MeJA处理下青蒿素合成增加;MeJA能够上调青蒿素合成正调控转录因子ORA的表达,这是MeJA诱导青蒿素合成途径中众多基因表达上调的分子基础。.基于此,在青蒿中过量表达MeJA合成关键酶基因JMT,提高内源MeJA合成,可能导致MVA途径,MEP途径以及青蒿素合成特有途径基因表达上调,使得青蒿素含量提高。结果表明转JMT青蒿中MeJA含量始终处于较高水平,从而激活包括青蒿素在内的一系列次生代谢产物生物合成,转JMT青蒿腺毛体密度增加,发育更加完全,青蒿素含量得到大幅度提高。.在青蒿中过表达HMGR基因,能够提高青蒿素含量。采用反义HMGR培育转基因青蒿,未能获得转基因材料,分析原因在于HMGR是植物MVA途径中的关键酶,MVA途径不仅为青蒿素等植物次生代谢产物合成提供前体,同时还为植物膜脂等重要从初生代谢产物合成提供底物,HMGR被抑制,影响到与植物生存有关代谢途径,导致未能获得转反义HMGR基因材料。在青蒿中过表达DXR基因,发现能够提高青蒿素含量,这是首次采用转基因方法证实MEP途径遗传改造能够提高青蒿素生物合成。同样未能获得转反义DXR基因的材料,原因在于DXR被抑制后,叶绿素合成收到严重影响,导致植株白化,不能存活。MVA途径和MEP途径遗传改造研究表明,增加这两条代谢途径产物的遗传改造方式都有利于青蒿素生物合成;这两条途径中任何一条途径被阻断,都会导致转青蒿致死。转基因结果表明对MVA和MEP途径遗传改造均能够提高青蒿素合成。
期刊论文列表
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Enhancement of artemisinin biosynthesis by overexpressing dxr, cyp71av1 and cpr in the plants of Artemisia annua L.
通过在青蒿植物中过表达 dxr、cyp71av1 和 cpr 增强青蒿素生物合成。
DOI:--
发表时间:2012-11
期刊:Plant Omics
影响因子:--
作者:廖志华
通讯作者:廖志华
DOI:10.5897/jmpr.9001219
发表时间:2011-01
期刊:Journal of Medicinal Plants Research
影响因子:--
作者:Meifang Peng;Min Chen;Rong Chen;Xiaozhong Lan;Minghsiun Hsieh;Zhihua Liao
通讯作者:Zhihua Liao
DOI:--
发表时间:2012
期刊:中国中药杂志
影响因子:--
作者:向礼恩;严铮辉;王贵君;刘万宏;唐克轩;廖志华
通讯作者:廖志华
DOI:10.5897/jmpr11.1461
发表时间:2012-01
期刊:Journal of Medicinal Plants Research
影响因子:--
作者:Lixia Zeng;Min Chen;Xiaozhong Lan;Zhihua Liao
通讯作者:Zhihua Liao
假托品类生物碱托品林生物合成与代谢工程研究
  • 批准号:
    32370277
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    50万元
  • 批准年份:
    2023
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
低温诱导青蒿素生物合成的分子机制研究
  • 批准号:
    81973420
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    55.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
托品烷生物碱生物合成途径的全面解析与代谢工程及合成生物学研究
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    --
  • 资助金额:
    223万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
莨菪碱转运分子机理与代谢工程研究
  • 批准号:
    31770335
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    64.0万元
  • 批准年份:
    2017
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
WRKY类转录因子在托品烷类生物碱生物合成中的调控作用研究
  • 批准号:
    31370333
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    80.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
紫杉醇前体依赖于MEP途径合成的分子调控机理
  • 批准号:
    30771238
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    28.0万元
  • 批准年份:
    2007
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
银杏内酯前体生物合成途径中关键酶基因的克隆与功能分析
  • 批准号:
    30500303
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    24.0万元
  • 批准年份:
    2005
  • 负责人:
    廖志华
  • 依托单位:
国内基金
海外基金